二氨基联苯胺
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二氨基联苯胺(Diaminobenzidine,DAB)是辣根过氧化物酶最敏感、最常用的显色底物,反应产物因不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物而被广泛地用于蛋白印迹(Western Blot,WB)、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)和免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)、斑点印迹(Dot blot)和生物芯片(Biochip)等的染色和显色反应。
保存条件
试剂盒应在-20℃,避光、密封保存。
使用说明
使用前先用蒸馏水将B显色液(1:25)稀释为工作液,然后按比例(1:25)加入A显色液,混匀后立即使用。显色时间1-30分钟,显色时间过长可引起本底增高,故应密切观察显色过程(一般3-10分钟最理想),并在本底较浅且达到适当显色强度时以流水漂洗终止显色反应。
稀释方法:取去离子水920ul,加入B显色液40ul混匀,再加入40ul的A显色液,混匀后即可使用。工作液建议用量:免疫组化50-100ul/切片,WB每张膜200-5000ul/膜
注意事项
1. DAB溶液应低温密封保存。如有结晶析出,应确保结晶完全溶解再行使用;
2. 显色工作液应现用现配,新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色,如颜色过深,请勿使用;
3. DAB在常温下不稳定,每次取用后均应及时加盖密封放回冰箱,以免因DAB分解影响实验,或因渗漏造成实验环境污染;
4. DAB有潜在致突变作用,操作时应注意穿戴好防护用具。
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