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2）标准加入法：在标准曲线法中，一般情况下要求标准溶液和未知溶液的组成保持一致。但在实际工作中不是总能做到的，采用标准加入法可以克服这个缺点。本法把未知试样溶液分成体积相同的若干份，留其中一份，其余分别加入不同量的标准样品，然后测定各溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，标准样品加入量为横坐标绘制标准曲线（图16-1）。由于未知样品中含待测组分，故直线不通过原点而是在吸光度高于原点的A₀处与纵轴相交，且直线外推法使[[工作曲线]]延长交横轴处于B点，则OB所对应的浓度Cx就是未知试样中待测组分浓度。

图16-1 标准加入法工作曲线

在免疫比浊过程中，由于抗原与抗体结合有三个阶段，从而导致吸光度与浓度之间不呈[[线性关系]]，一般是三次程曲线关系。如果要将抗原与抗体两个变量之间的变动特征恰当地反映出来，需要经三次程拟合成近似直线化的曲线方程，再进行运算。方法可采用终点法和速率法，用五个不同浓度进行定标，经三次曲线方程求出一条能反映真实情况的浓度与吸光度的关系曲线方程。作为定量的工作曲线。

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