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（5）利用摩尔[[吸光系数]]进行检测：①吸光系数：Beer定律的数学表达式为A=kbc，若溶液的浓度c以g/L为单位，b为光径以cm为单位，则常数K称为吸光系数，以a表示，其单位为升/（克.厘米）［L/(g.cm］,A=kbc可写成A=abc。②摩尔吸光系数：公式A=kbc中的以为1mol/L,b为1cm时，则系数k称为摩尔吸光系数，以ε表示，单位为升/（摩尔.厘米）［L/(mol.cm）］，A=kbc可写成A=εc。在实际工作中，不能直接用1mol/L这种高浓度的溶液测定吸光度，而是在稀释成适当浓度时测定吸光度进行运算。ε值与入射光波长、溶液的性质等因素有关。如NADH在260nm时ε为15000，写成ε₂₆₀^NADH=15×10；在340nm时ε为6220，写成ε15×10³；在340nm时ε为6220，写成ε₃₄₀^NADH=6.22×10。③比吸光系数：如公式A22×10³。③比吸光系数：如公式A=kbc中的c是[[百分浓度]]（w/v）b为cm，则常数k可用E表示，称为比吸光系数或百分吸光系数，Av）b为cm，则常数k可用E^%表示，称为比吸光系数或百分吸光系数，A=kbc可写成A=Ebc。当待测物的E^%bc。当待测物的[[化学]]结构是已知者可用ε值分析，若所测物的化学结构是未知的，则ε无法确定，此时用比吸光系数分析就很方便。a、ε和E常用作粗定量分析，主要用于定性分析。

2、[[原子吸收分光光度法]]　原子吸收光光度法是基于元素所产生的原子蒸气中，待测元素的基态原子，对所发射的特征谱线的吸收作用进行定量分析的一种技术。具有灵敏度高、选择性好、操作简便、分析速度快等优点，对大部分元素，其灵敏度约为10～10g　原子吸收光光度法是基于元素所产生的原子蒸气中，待测元素的基态原子，对所发射的特征谱线的吸收作用进行定量分析的一种技术。具有灵敏度高、选择性好、操作简便、分析速度快等优点，对大部分元素，其灵敏度约为10^-8～10^-10g/ml，是[[微量元素]]检测的一个十分有铲的方法之一。

2）标准加入法：在标准曲线法中，一般情况下要求标准溶液和未知溶液的组成保持一致。但在实际工作中不是总能做到的，采用标准加入法可以克服这个缺点。本法把未知试样溶液分成体积相同的若干份，留其中一份，其余分别加入不同量的标准样品，然后测定各溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，标准样品加入量为横坐标绘制标准曲线（图16-1）。由于未知样品中含待测组分，故直线不通过原点而是在吸光度高于原点的A处与纵轴相交，且直线外推法使1）。由于未知样品中含待测组分，故直线不通过原点而是在吸光度高于原点的A₀处与纵轴相交，且直线外推法使[[工作曲线]]延长交横轴处于B点，则OB所对应的浓度Cx就是未知试样中待测组分浓度。

1）溶剂：增大溶剂的极性，将使π-π跃迁的能量降低，荧光增强。在水、π^※跃迁的能量降低，荧光增强。在水、[[乙醇]]、环已烷等这些常用溶剂中常含有荧光杂质，影响测定，必须在使用前作净化处理。

| 荧光素+AgNO₃

| 10mol10^-6mol/L

| 2×10mol2×10^-6mol/L

| 10^-4

| 3×10^-3

| 10^-4

| 10^-3

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