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茶碱的HPLC检测各种实验室具体方法不尽相同，但大多采用反相HPLC，以β-[[羟乙]]基茶碱或8-氯茶碱为内标，紫外检测器λ＝275nm（茶碱最大吸收波长）检测。为排除标本中可能存在的与茶碱有相近光吸收峰的某些[[半合成]][[青霉素]]、[[头孢菌素]]的干扰，样本应以适当方法提取。此外，为保证能分离可能存在的因食入或茶碱代谢生成的其他[[甲基黄嘌呤]][[衍生物]]，如[[咖啡因]]、[[可可碱]]、[[二甲基黄嘌呤]]等，在建立方法时即应适当调整流动相，并进行必要的干扰实验证实。
紫外光度法较成熟的是双波长法。其原理为酸化标本并以有机[[溶剂提取]]，再反提至0.1mol/LNaOH溶液中，以[[氯化铵]]调节至pH10左右。分别在275nm及300nm测A和A，以A调节至pH10左右。分别在275nm及300nm测A<sub>275</sub>和A<sub>300</sub>，以A<sub>275</sub>-A差值作为茶碱的吸光度。该法分别酸化标本提取及反提回碱液中，可排除不少药物及其他杂质的干扰。将比色液pH调至10，茶碱吸收峰不变，但可使有相近吸收峰的A<sub>300</sub>差值作为茶碱的吸光度。该法分别酸化标本提取及反提回碱液中，可排除不少药物及其他杂质的干扰。将比色液pH调至10，茶碱吸收峰不变，但可使有相近吸收峰的[[巴比妥]]类峰转移而得以排除，并以A作为样本底吸光度值。经过上述改进，本法灵敏度、特异性都有较大提高，在2类峰转移而得以排除，并以A<sub>300</sub>作为样本底吸光度值。经过上述改进，本法灵敏度、特异性都有较大提高，在2-80μg/ml范围内存在极好的[[线性关系]]，回收率95％-102％，重复性良好（CV在4％-7％），并与免疫法、HPLC有很好相关性。本法的主要不足之处是不能排除HPLC法中提及的其它甲基黄嘌呤衍生物干扰。但由于本法不需特殊仪器，且能基本满足临床TDM的要求，仍不失为可供选用的一种方法。
此外，在HPLC和紫外光度法中，若以氨茶碱配制标准液时，应注意是每2分子茶碱与1分子[[乙二胺]]成盐，故需将氨茶碱重量乘以0.79，正确换算成茶碱重量。
*[[茶碱]]
