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基因转染
,== 转染的概念==
[[转染]](transfection)指真核[[细胞]]由于外源[[DNA]]掺入而获得新的[[遗传]]标志的过程。
== 转染方法的分类==
对外源基因转染[[方法]]的要求包括：
[[转移]]效率高，不影响细胞正常生理[[活动]]，低[[毒性]]，容易使用，[[重复性]]好，易获得[[稳定]]转化子.
根据转染的机制不同可划分为化学转染法和物理转染法两大类.
化学转染法
1.DEAE-[[葡聚糖]]法
DEAE葡聚是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一，DEAE-葡聚糖是阳[[离子]]多聚物，它与带负电的[[核酸]]结合后接近[[细胞膜]]而被摄取，用DEAE-葡聚糖转染成功地用用于瞬时表达的研究，但用于稳定转染却不是十分可靠。
2.[[磷酸]]钙法
磷酸钙法是磷酸钙共沉淀转染法，因为试剂易取得，价格便宜而被广泛用于瞬时转染和稳定转染的研究，先将DNA和[[氯化钙]]混合，[[然后]]加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸钙沉淀，最后把含有沉淀的混悬液加到培养的细胞上，通过细胞胞膜的内吞[[作用]]摄入DNA。磷酸钙似乎还通过[[抑制]][[血清]]中和细胞内的[[核酸酶]]活性而保护外源DNA 免受降解.
3.人工[[脂质体]]法
人工脂质体法采用阳离子脂质体，具有较高的转染效率，不但可以转染其他化学方法不易转染的[[细胞系]]，而且还能转染从寡[[核苷酸]]到人工[[酵母]][[染色体]]不同长度的DNA，以及RNA,和[[蛋白质]].此外，脂质体体外转染同时适用于瞬时表达和稳定表达，与以往不同的是脂质体还可以介导DNA和RNA 转入动物和人的体内用于[[基因治疗]].人工合成的阳离子脂质体和带负电荷的核酸结合后形成复合物，当复合物接近细胞膜时被内吞成为内体进入[[细胞质]]，随后DNA 复合物被释放进入[[细胞核]]内，至于DNA 是如何穿过[[核膜]]的，其机理目前还不十分清楚.。
物理方法
1.显微注射显微注射虽然费力，但是非常有效的将核酸导入细胞或细胞核的方法。
2.电[[穿孔]]
这种方法常用来制备[[转基因动物]]，但却不适用于[[需要]]大量转染细胞的研究。电穿孔法常用来转染如植物园生智体这样的常规方法[[不容]]易转染的细胞。电穿孔靠[[脉冲]]电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。导入的效率与脉冲的强度和持续时间有关系。
3.[[基因]]枪法
基因枪依靠携带了核酸的高速粒子而将核酸导入细胞内，这种方法适用于培养的细胞核在体内的细胞。
== 百科帮你涨知识 ==
[http://www.zk120.com/ji/ 查找更多中医古籍]
[http://www.zk120.com/an/ 查找更多名老中医的医案]
[http://www.zk120.com/fang/ 查找更多方剂]
[[转染]](transfection)指真核[[细胞]]由于外源[[DNA]]掺入而获得新的[[遗传]]标志的过程。
== 转染方法的分类==
对外源基因转染[[方法]]的要求包括：
[[转移]]效率高，不影响细胞正常生理[[活动]]，低[[毒性]]，容易使用，[[重复性]]好，易获得[[稳定]]转化子.
根据转染的机制不同可划分为化学转染法和物理转染法两大类.
化学转染法
1.DEAE-[[葡聚糖]]法
DEAE葡聚是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一，DEAE-葡聚糖是阳[[离子]]多聚物，它与带负电的[[核酸]]结合后接近[[细胞膜]]而被摄取，用DEAE-葡聚糖转染成功地用用于瞬时表达的研究，但用于稳定转染却不是十分可靠。
2.[[磷酸]]钙法
磷酸钙法是磷酸钙共沉淀转染法，因为试剂易取得，价格便宜而被广泛用于瞬时转染和稳定转染的研究，先将DNA和[[氯化钙]]混合，[[然后]]加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸钙沉淀，最后把含有沉淀的混悬液加到培养的细胞上，通过细胞胞膜的内吞[[作用]]摄入DNA。磷酸钙似乎还通过[[抑制]][[血清]]中和细胞内的[[核酸酶]]活性而保护外源DNA 免受降解.
3.人工[[脂质体]]法
人工脂质体法采用阳离子脂质体，具有较高的转染效率，不但可以转染其他化学方法不易转染的[[细胞系]]，而且还能转染从寡[[核苷酸]]到人工[[酵母]][[染色体]]不同长度的DNA，以及RNA,和[[蛋白质]].此外，脂质体体外转染同时适用于瞬时表达和稳定表达，与以往不同的是脂质体还可以介导DNA和RNA 转入动物和人的体内用于[[基因治疗]].人工合成的阳离子脂质体和带负电荷的核酸结合后形成复合物，当复合物接近细胞膜时被内吞成为内体进入[[细胞质]]，随后DNA 复合物被释放进入[[细胞核]]内，至于DNA 是如何穿过[[核膜]]的，其机理目前还不十分清楚.。
物理方法
1.显微注射显微注射虽然费力，但是非常有效的将核酸导入细胞或细胞核的方法。
2.电[[穿孔]]
这种方法常用来制备[[转基因动物]]，但却不适用于[[需要]]大量转染细胞的研究。电穿孔法常用来转染如植物园生智体这样的常规方法[[不容]]易转染的细胞。电穿孔靠[[脉冲]]电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。导入的效率与脉冲的强度和持续时间有关系。
3.[[基因]]枪法
基因枪依靠携带了核酸的高速粒子而将核酸导入细胞内，这种方法适用于培养的细胞核在体内的细胞。
== 百科帮你涨知识 ==
[http://www.zk120.com/ji/ 查找更多中医古籍]
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[http://www.zk120.com/fang/ 查找更多方剂]
