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培养基
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===[[细菌培养]]基===
牛肉膏[[琼脂培养基]]
牛肉膏0.3g ，蛋白胨1.0g，[[氯化钠]] 0.5g，[[琼脂]] 1.5g， 水 100ml
在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用10%[[盐酸]]或10%的[[氢氧化钠]]调整pH值到7.2～7.6,分装在各个[[试管]]里，加[[棉花]]塞，用[[高压蒸汽灭菌]]30分钟。
马铃薯培养基
取新鲜牛心（除去脂肪和[[血管]]）250克，用刀细细剁成肉末后，加入500毫升[[蒸馏水]]和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖2小时。过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。
[[根瘤菌]]培养基
葡萄糖 10g [[磷酸氢二钾]] 0.5g [[碳酸钙]] 3g [[硫酸镁]] 0.2g [[酵母]]粉 0.4g 琼脂 20g 水 1000ml 1%[[结晶紫]]溶液 1ml
先把琼脂加水煮沸溶解，然后分别加入其他组分，搅拌使溶解后，分装，灭菌，备用。
===[[放线菌]]培养基===
淀粉硝酸盐培养基（高氏一号培养基）
[[可溶性淀粉]] 2.0g [[硝酸钾]] 0.1g 磷酸氢二钾 0.05g 氯化钠 0.05g 硫酸镁 0.05g [[硫酸亚铁]] 0.001g 琼脂 2g 水100ml
先把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。
面粉琼脂培养基
面粉 60g 琼脂 20g 水1000ml
把面粉用水调成糊状，加水到500ml，放在文火上煮30分钟。另取500ml水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整pH值到7.4，分装，灭菌，备用。
取花园土未施过肥0。5kg置于烧杯或三角瓶中，加入蒸馏水1000毫升，瓶口用透气塞封口，在水浴中沸水加热2小时，冷却数小时，在[[无菌]]条件下过滤，取[[上清液]]，将灭菌蒸馏水加入上清液至总体积1000毫升。土壤提取液保存在4ºC备用。
Composition of the <b>A5 solution</b>
Add to 100 ml of distilled water:
A5溶液和EDTA-Fe溶液配制方法同上。
===[[真菌]]培养基===
萨市（Sabouraud’s）培养基
蛋白胨 10g 琼脂 20g [[麦芽糖]] 40g 水1000ml
先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40g麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。
本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。
马铃薯糖琼脂培养基
把马铃薯洗净去皮，取200g切成小块，加水1000ml，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入10g琼脂，煮沸溶解后加糖20g（用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖），补足水分，分装，灭菌，备用。
把这培养基的pH值调到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢[[杆菌]]。
豆芽汁培养基
黄豆芽 100g 琼脂15 g 葡萄糖 20g 水1000ml
洗净黄豆芽，加水煮沸30分钟。用[[纱布]]过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解后放入糖，搅拌使它溶解，补足水分到1000ml，分装，灭菌，备用。
把这培养基的pH值调到7.2～7.4，可用来培养细菌和放线菌。
[[豌豆]]琼脂培养基
豌豆 80粒 琼脂 5g 水 200ml
取80粒干豌豆加水，煮沸1小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮沸到溶解，分装，灭菌，备用。
===食用菌菌种培养基===
马铃薯-蔗糖-琼脂培养基
20%马铃薯煮汁 1000ml 蔗糖 20g 琼脂 18g
把马铃薯洗净去皮后，切成小块。称取马铃薯小块200g，加水1000ml，煮沸20分钟后，过滤。在滤汁中补足水分到1000ml，即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，补足水分，分装，灭菌，备用。使用该培养基对pH值要求不严格，可以不测定。
综合马铃薯培养基
20%马铃薯煮汁 1000 ml [[磷酸二氢钾]] 3g 硫酸镁 1.5g 葡萄糖 20g 维生素 10mg 琼脂 18g
在植物组织培养时,通过调节IAA和CTK的比值能影响[[愈伤组织]][[分化]]出根或芽.CTK/IAA高时,愈伤组织分化芽
CTK/IAA低时,分化根;CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化
愈伤组织诱导培养基制备
以MS培养基母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入[[大量元素]]20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,铁盐100×母液20mL ,维生素100×母液20mL,[[肌醇]]200×母液10mL,[[甘氨酸]]200×母液10mL,配制得MS培养基后,再加入0.5mg.L-1的BA8mL,0.5mg.L-1的NAA8mL.然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,用0.5mol.L-1的NaOH和0.5 mol.L-1的HCl调整pH值至5.8-6.0.加入14g琼脂,将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂完全溶化,然后用蒸馏水定容至终体积2L,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中.
烟草叶片愈伤组织诱导取一无菌[[培养皿]],用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于[[无菌培养]]皿中,并用解剖刀将叶片切成2mm2左右的小片,然后将其[[接种]]于准备好的培养基上,每瓶接种5小片,一共接种6瓶.接种后的三角置于24条件下黑暗培养1周,然后在同样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3瓶).观察愈伤组织诱导结果,统计愈伤组织诱导率.
器官分化及植株再生培养
将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照,温度20-22 C条件下培养3周,统计愈伤组织[[再生植株]]情况.
愈伤组织诱导的总体情况
烟草愈伤组织诱导培养4周后,愈伤组织基本形成,即排除因生长时间不够而未形成愈伤的情况.具体情况见表一中所示,6瓶[[培养物]]均有愈伤形成,且都未发生污染,但诱导率几乎各不相同.其中, 在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为60.0℅, 在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%.由于实验过程中,[[外植体]]即烟草叶片取得偏小,接种时可能已有部分外植体的大部分[[细胞]]脱水死亡,使整个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小.
选择性培养基
酵母菌富集培养基
葡萄糖5% [[尿素]]0.1% 硫化铵0.1% 磷酸二氢钾0.25% [[磷酸氢二钠]]0.05% 七水合硫酸镁0.1% 七水合硫酸铁0.01% [[酵母膏]]0.05% 孟加拉红0.003% pH4.5
Ashby无氮培养基
富集好养自生[[固氮菌]]
[[甘露醇]]1% 磷酸二氢钾0.02% 七水合硫酸镁0.02% 氯化钠0.02% 二水合[[硫酸钙]]0.01% 碳酸钙0.5%
EMB培养基
常用于鉴别E.coli
蛋白胨 10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氢二钾2g [[伊红]]Y 0.4g [[美蓝]]0.065g 蒸馏水1000g pH7.2
2216E培养基配方
分离海洋微生物的培养基配方
蛋白胨 5g 酵母膏 1g [[磷酸]]高铁 0.01g 琼脂 15~20g 陈海水 1000ml 煮沸氢氧化钠（5%）的溶液调PH值7.6~7.8
血清种类
目前用于组织培养的血清主要是[[牛血清]]，培养某些特殊细胞也用人血清、[[马血清]]等。选择用牛血清培养细胞的原因：来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的，但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。
牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10-30天的小牛。显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的[[抗体]]、[[补体]]等对细胞有害的成分最少。
血清的主要成分血清是由血浆去除[[纤维蛋白]]而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、[[生理]]条件和营养条件不同而异。血清中含有各种[[血浆蛋白]]、[[多肽]]、脂肪、碳水化合物、[[生长因子]]、[[激素]]、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。
2. 提供激素和各种生长因子：[[胰岛素]]、[[肾上腺皮质激素]]（[[氢化可的松]]、[[地塞米松]]）、[[类固醇激素]]（[[雌二醇]]、[[睾酮]]、[[孕酮]]）等。生长因子如[[成纤维细胞生长因子]]、[[表皮生长因子]]、[[血小板生长因子]]等。
3. 提供[[结合蛋白]]：结合蛋白作用是携带重要地[[低分子量]]物质，如[[白蛋白]]携带维生素、脂肪、以及激素等，[[转铁蛋白]]携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。
4. 提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。
5. 对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如[[内皮细胞]]、[[骨髓]]样细胞可以释放[[蛋白酶]]，血清中含有[[抗蛋白酶]]成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止[[胰蛋白酶]]的[[消化]]作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于[[贴壁细胞]]的消化[[传代]]。[[血清蛋白]]形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在[[悬浮培养]]搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢[[解毒]]中起重要作用，如SeO3,硒等。
血清培养基主要问题
1. 血清的成份可能有几百种之多，目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识，这给研究工作带来许多困难。
2. 血清都是批量生产，各批量之间差异很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保证每批血清的相似性极为困难，从而使实验的标准化和连续性受到限制。
3. 对大多数细胞，在体内状态，血清不是它们接触的生理学液体，只是在损伤愈合以及[[血液凝固]]过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态，血清可能促进某些细胞的生长（[[成纤维细胞]]）同时抑制另一类细胞生长（[[表皮细胞]]）。
4. 血清含一些对细胞产生[[毒性]]的物质，如多[[胺氧化酶]]，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应（如[[精胺]]、亚精胺）形成有[[细胞毒性]]作用的聚精胺。补体、抗体、[[细菌毒素]]等都会影响细胞生长，甚至造成[[细胞死亡]]。
5. 动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异甚大，其成分不能保持一致。
6. 取材中可能带入[[支原体]]、[[病毒]]，对细胞产生潜在影响，可能导致实验失败或实验结果不可靠性。
7. 大规模生产中，血清来源越来越困难，价格昂贵，是构成动物细胞培养对生产成本的主要部分之一。
血清的质量标准
2. 有些国家还要求牛血清来自未用过[[反刍动物]][[蛋白]][[饲料]]的牛群。
3. 证明所用牛血清中不含对所生产[[疫苗]]病毒的抑制物。
4. 血清要通过滤膜过滤除菌，保证无菌。
5. 无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染，有些国家要求无细菌[[噬菌体]]污染。
6. 对细胞有良好的支持繁殖作用。
我国在对牛血清的质量2000年版《中国生物制品主要原辅料[[质控]]标准》中提出比较严格的标准要求。包括[[蛋白质]]含量，细菌、真菌、支原体、牛病毒、[[大肠杆菌噬菌体]]、[[细菌内毒素]]，[[支持细胞]][[增殖]]检查。
[[分类:微生物]][[分类:生物]][[分类:培养]][[分类:检验医学]]
