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脉冲场凝胶电泳

删除4字节, 2017年3月16日 (四) 23:19
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11. 将凝胶块放入装有TE及0.04mg/ml PMSF溶液的Falcon[[试管]]中,灭活残留的蛋白酶K。
12. 室温下用TE溶液漂洗凝胶块数次,将凝胶块放入另一干净的试管,可直接用于酶切反应或用0.5mol/L
EDTA,(pH8.0)4℃保存凝胶块。
4.室温下用TE及100 mmol/L NaCl溶液[[温育]]2天。  
===[[酵母]][[染色体]]===
1.从YPD(酵母提取物,[[蛋白胨]]和[[葡萄糖]])[[培养基]]瓶皿中挑选单一克隆加入10ml
YPD预培养的肉汤中,30℃下剧烈震荡生长24小时,然后加入200ml YPD肉汤,剧烈振荡24~48h(产量大约100块)。
2.4000×g转速,离心10min,然后用50mmol/L EDTA/10 mmol/L Tris-HCl(pH7.5)溶液悬浮。
3.仍以4000×g转速离心10min,再用SCE[1 mol/L [[山梨醇]],0.1mol/L枸椽酸钠,pH5.8及10 mmol/L
EDTA (pH7.5)]溶液重悬。
2.在Falcon试管中用1×TE溶液漂洗凝胶块20min 3次,以去除EDTA。
3.混合:[[酶反应]]缓冲液(高、中或低盐缓冲液),100
mmol/L亚[[精胺]](只用于高盐缓冲液状态),10~20单位的[[内切酶]]。20单位的内切酶就足以过夜完全消化10μg DNA。
12. 采用标准Southern印迹方案将DNA转印至[[尼龙]]膜上。一般来说,印迹PFGE凝胶的时间较普通凝胶印迹时间长(约48h)。
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