血小板ATP释放试验
概述
血小板释放反应中产生的ADP在磷酸烯醇丙酮酸(PEP)作用下转变成ATP,通过荧光强度测定可计算出血小板释放的ATP和ADP总量。
检查名称
血小板ATP释放试验
分类
取材
血液
血小板ATP释放试验的原理
血小板受诱导剂刺激后,致密体(δ)颗粒中的ATP被释放至血小板外,测定血小板外液中ATP含量,可以反映血小板的释放功能。
试剂
(1)灭活缓冲液:0.2mol/L Tris-马来酸盐缓冲液(pH7.4)1ml,加0.01mol/L磷酸丙酮酸盐溶液(含0.4mol/L硫酸镁与1.3mol/L氯化钾)100μl,加水至25ml;再加入10mg/ml丙酮酸激酶10μl,在沸水浴中加热30min,冷却至室温。
(2)活化缓冲液:配制同上,但不经煮沸。
(3)荧光素-荧光素酶溶液(溶于0.01mol/L吗啉丙烷内脂酸,pH7.4,含0.01mol/L硫酸镁)。
(4)ADP标准品。
(5)荧光检测仪。
操作方法
(1)在两支试管内分别加1ml灭活缓冲液与1ml活化缓冲液。
(2)分别加50μl标本,摇匀,在室温下温育10min,再将标本置于80~100℃水浴6min,然后移至冰浴。
(3)将10μl标准品或标本加入含100μl荧光素-荧光素酶溶液的小试管中,测定吸光度,重复3次,求得平均值。
正常值
(1)加ADP(3.6×10-6mol/L)时,ATP释放量为1.8±0.8μmol/1011血小板。
(2)加肾上腺素(9×10-6mol/L)时,ATP释放量为1.7±0.4μmol/1011血小板。
(3)加胶原(0.28g/L)时,ATP释放量为1.6±0.3μmol/1011血小板。
化验结果临床意义
血小板ATP释放量减少:见于骨髓增生综合征;在原发性血小板减少性紫癜患者中。ADP及肾上腺诱导剂所致的血小板释放ATP量减少,而胶原诱导的释放量正常;在多发性骨髓瘤和何杰金病中亦减少。此外,在某些贮存池病中和服用抗血小板药后,ATP含量亦减低。
附注
相关疾病
血小板减少性紫癜、多发性骨髓瘤、败血症