血清已糖
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概述
糖原也属于一种多糖,但其仅由葡萄糖构成。此外,人体内还存在少量果糖、乳糖、木糖、已糖等。
血清已糖的医学检查
检查名称
血清已糖
分类
取材
血液
血清已糖的测定原理
在已糖激酶催化下,葡萄糖和ATP发生磷酸化反应,生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)与ADP。前者在葡萄糖-6-磷酸脱氢-6-磷酸脱氢酶(G6PD)催化下脱氢,生成6-磷酸葡萄糖酸(6-GP),同时使NADP+还原成NADPH。反应式如下:
根据反应方程式,NADPH的生成速率与已糖浓度呈正比,在波长340nm监测吸光度升高速率,计算血清中已糖浓度。
试剂
(1)酶混合试剂的成分与浓度:
缓冲液(pH7.5) 50mmol/L
MgSO4 2mmol/L
ATP 2.0mmol/L
NADP+ 2.0mmol/L
HK ≥1500U/L
G6PD 2500U/L
根据试剂盒说明书复溶后,混合配制成酶试剂,置棕色瓶中放冰箱保存,约可稳定7天。
(2)5mmol/L已糖标准应用液:见GOD法。
操作方法
(1)速率法测定(以半自动分析仪为例):
①主要参数:
系数 8.2
孵育时间 30s
监测时间 60s
波长 340nm
吸样量 0.5ml
温度 37℃
②加样:37℃预温酶混合试剂1000μl,加血清20μl,立即吸入自动分析仪,监测吸光度升高速率(△A/min)。
③计算:
(2)终点法测定:取16mm×100mm试管,按表1编号与操作。
以上各管充分混匀,在37℃水浴,准确放置10min,分光光度计波长340nm、比色杯光径10mm,用蒸馏水调零,分别读取各管吸光度(Au、Ac、As、Ab)。
正常值
6.74±0.07mmol/L(121.5±1.3mg/dl)。
化验结果临床意义
升高:肝硬化、慢性肝炎。
附注
(1)已糖激酶方法的特异性比葡萄糖氧化酶法高,是目前公认为测定血糖的参考方法,适用于自动分析仪。轻度溶血、脂血、黄疸、维生素C、氟化钠、肝素、EDTA和草酸盐等不干扰本法测定。因为从红细胞释放出的有机磷酸酯和一些酶能消耗NADP,故干扰本法测定。
(2)虽然根据NADPH的摩尔吸光度可以直接计算血清葡萄糖浓度(如Boehringer、Roche等试剂盒),但建议最好同时测定标准管和空白管(蒸馏水代替血清)。此时计算公式应为:
相关疾病
肝硬化、黄疸