酸性磷酸酶染色

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概述

大部分血细胞内均存在酸性磷酸酶活性,胞质内的酸性磷酸酶在酸性条件下,经水解,再与硝酸铅硫酸作用,可生成棕黄色或棕黄色的硫酸铅沉淀。

酸性磷酸酶染色的别名

抗酒石酸酸性磷酸酶染

化验取材

血液

原理

在酸性条件下,磷酸萘酚AS-BⅠ被细胞内酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)水解产生萘酚AS-BⅠ,再与重氮盐偶联,形成不溶性有色沉淀。

试剂

(1)甲醇-丙酮缓冲液

枸橼酸 0.63g

蒸馏水 30ml

甲醇 10ml

丙酮 60ml

用浓氢氧化钠溶液调整pH至5.4,用前过滤,4~10℃可保存1个月。

(2)基质储备液:磷酸萘酚AS-BⅠ100mg,N,N-二甲基甲酰胺10ml,混合后置棕色瓶4~10℃可保存2~3个月。

(3)0.1mol/L乙酸缓冲液:甲液:乙酸钠(3H2O)13.6g,溶于蒸馏水1000ml。乙液:冰乙酸6.0ml溶于l000ml蒸馏水中。用乙液滴定甲液至Ph 5.2,放4~10℃可保存3个月。

(4)0.05mol/L乙酸酒石酸缓冲液:L-酒石酸3.75g,0.1mol/L乙酸缓冲液490ml,用浓氢氧化钠溶液调整pH至5.2,再加蒸馏水至500ml,4-10℃可保存3个月。

(5)作用液:0.05mol/L乙酸-酒石酸缓冲液50ml,基质储备液1.0ml,坚牢紫酱GBC 25mg,溶解后过滤,立即染色,一次用完。

操作方法

新鲜骨髓片或血片,用冷甲醇-丙酮缓冲液固定30s,蒸馏水漂洗5~6次,晾干。放入作液37℃保温45~60min,水洗。用苏木素染液或甲基绿染液复染细胞核1~6min,水洗,晾后镜检阳性对照(即酸性磷酸酶染色):染色过程同上,用0.1mol/L乙酸缓冲液代替乙酸-石酸缓冲液。

正常值

阳性:粒细胞、T淋细胞、浆细胞、巨核细胞、血小板、幼红细胞和单核-巨噬系统细胞。

磷酸萘酚AS-BI染色法: 阳性:胞浆中有鲜红色或深红色颗粒,反应强度分为6级:0~5+(染色颗粒多寡和染色深浅为分级标准)

化验结果临床意义

酸性磷酸酶染色能帮助鉴别戈谢细胞(呈阳性反应)及尼曼-皮克细胞(呈阴性反应);红血病及红白血病时幼红细胞呈核旁单侧阳性反应;多发性骨髓瘤细胞、急性单核细胞性白血病恶性组织细胞增生症细胞、多毛细胞白血病、T淋巴细胞性白血病等均呈强阳性反应。

(1)阳性: 毛细胞白血病。

(2)弱阳性:淋巴细胞白血病。

(3)阴性: 粒系细胞白血病、单核细胞白血病、巨核细胞白血病。

附注

酸性磷酸酶染色,必要时加做L-酒石酸抑制试验,即为酸性磷酸酶染色被酒石酸抑制;反之则不被酒石酸抑制,产生不溶性红色沉淀,定位于胞质内。这对鉴别诊断多毛细胞白血病有重要意义(L-酒石酸抑制试验仍呈阳性),而多发性骨髓瘤细胞,急性单核细胞性白血病细胞、恶性组织细胞增生症细胞均可被L-酒石酸所抑制,阳性反应明显减弱。

相关疾病

单核细胞性白血病、多发性骨髓瘤、多毛细胞白血病、恶性组织细胞增生症


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