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脑脊液氨基酸

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创建页面,内容为“== 概述== 神经系统中存在有大量的游离氨基酸,这些物质除参与神经系统的一般代谢过程与维持细胞内,外水...”
== 概述==

[[神经系统]]中存在有大量的游离[[氨基酸]],这些物质除参与神经系统的一般[[代谢]]过程与维持[[细胞]]内,外[[水分]]及[[电解质]][[平衡]]外,还做为化学[[传递]]物质参与[[神经]][[兴奋]]及[[抑制]]调节,对[[神经细胞]]有兴奋[[作用]]的氨基酸如[[谷氨酸]]、[[天冬氨酸]]等酸性氨基酸,具有抑制作用的如γ[[氨基丁酸]]([[GABA]])与[[甘氨酸]]。谷氨酸在脑及[[脊髓]]内含量丰富,以[[大脑半球]]和[[小脑]]中为最多;[[门冬氨酸]]在腹角[[灰质]]中含量较高,这两种氨基酸可为神经[[兴奋性]]递质。[[γ-氨基丁酸]]在脑中含量甚多,不参与[[蛋白质]]的构成,而在脑[[能量代谢]]中占重要位置,可为一种重要的抑制递质;甘氨酸中的游离型存在于整个[[中枢神经系统]]、[[脑脊液]]、[[血清]]和其他[[组织]]中,以脊髓灰质中的浓度最高,脑的甘氨酸可能来自[[血浆]]或脑蛋白的[[分解]]及由[[葡萄糖]]和[[丝氨酸]]转变而来。目前推测甘氨酸可能是脊髓中何[[神经元]]的抑制性递质。

== 脑脊液氨基酸的医学检查==
检查名称
脑脊液氨基酸 分类
[[体液]]和[[排泄]]物[[检查]] > [[脑脊液检查]] 化验取材
脑脊液 脑脊液氨基酸的测定原理
单向纸[[层析]]或薄层层析法均不能使几十种氨基酸完全[[分离]],双向层析是将已经过单向层析的滤纸或薄层层析板旋转90度后,再用其他[[溶剂]]进行层析,使单向层析时未分离的氨基酸得到分离。

先利用阳[[离子交换树脂]]将血清、血浆、脑脊液和[[尿液]]中的氨基酸交换[[吸附]],用水洗去盐份后,再用[[氨水]]将氨基酸[[洗脱]]。氨[[蒸发]]后,得到较浓和较纯的含氨基酸[[样品]],再进行双向层析,从而进行[[鉴定]]。

[[含硫氨基酸]]层析时常得不到满意的分离,可在点样后加H2O2使它们氧化成相应的砜或磺酸,再作层析分离。 试剂
(1)脱盐用层析柱:[[大小]]如图1。

(2)阳离子交换树脂:Dowex-50×8,50~100目H+型

(3)2mol/L氨水

(4)[[磺基]][[水杨酸]]

(5)[[微晶纤维素]]薄层层析板(10cm×10cm)

(6)30%过氧化化氢(每ml中加0.2mg钼酸铵作为[[催化剂]])。

(7)层析溶剂:第一向为[[正丁醇]]:[[吡啶]]∶水(1∶1∶1,V/V);第二向为88%[[苯酚]]:25%氨水∶水(10∶0.05∶1,V/V),每200ml加8-羟[[喹啉]]1mg。

(8)2g/L或5g/L茚三酮[[丙酮]]液。

(9)层析缸、电吹风和点样毛细管等。 操作方法
(1)脱盐:取已[[过滤]]的脑脊液10ml加入装有5ml Dowex-50×8离子交换树脂的层析柱内,用100ml[[蒸馏水]]淋洗层析柱,流出液弃去。用2mol/L氨水30ml洗脱氨基酸。洗脱液在40℃真空蒸发,[[残渣]]溶于1ml蒸馏水中。

脑脊液用1ml,先经磺基水杨酸40mg去蛋白,离心后取上[[清液]]0.5ml加入装有1ml Dowex 50×8的层析柱内,用40ml蒸馏水淋洗层析柱,流出液弃去。用2mol/L氨水15ml洗脱氨基酸。洗脱液在40℃真空蒸发,残渣溶于0.05ml蒸馏水

(2)点样:在薄层层析板的左下角距二边1.5cm处,点加脑脊液的脱盐浓缩液4μl;点样量以2μg[[氨基]]氮为度,且直径愈小愈好。

(3)氧化含硫氨基酸:在点样处加0.5μl含钼酸铵的H2O2,在室温放置30min。

(4)展层:先将薄层层析板置于盛有第一向溶剂的层析缸中,展层约60min,即溶剂上升至9.5cm处时取出,再在40℃气流中吹30min。将薄层层析板转90℃再放入盛有第二向溶剂的层析缸中展层约100min,即溶剂上升至9.5cm处时取出在40℃放过夜。

(5)向薄层层析板喷洒茚三酮试剂,再置100℃烘箱30min,观察氨基酸的紫蓝色斑点,[[脯氨酸]]斑点为黄色。

正常值
[[HPLC]]法:

天冬氨酸(Aspartic Acid,[[Asp]]) 1.6±1.7μmol/L

谷氨酸(Glutamic Acid,[[Glu]]) 4.6±1.2μmol/L

丝氨酸(Serine,[[Ser]]) 33.9±4.9μmol/L

[[组氨酸]](Histidine,[[His]]) 10.0±2.7μmol/L

甘氨酸(Glycine,[[Gly]]) 8.6±2.1μmol/L

[[苏氨酸]](Threomine,[[Thr]]) 32.4±12.6μmol/L

[[精氨酸]](Arginine,[[Arg]]) 35.5±6.1μmol/L

[[丙氨酸]](Alanine,[[Ala]]) 47.2±9.1μmol/L

[[酪氨酸]](Tyrosine,[[Tyr]]) 10.7±2.0μmol/L

[[胱氨酸]](Cystine,[[Cys]]) 1.0±1.1μmol/L

[[蛋氨酸]](Methionine,[[Met]]) 0.3±0.5μmol/L

[[缬氨酸]](Vatine,[[Val]]) 18.7±4.1μmol/L

[[苯丙氨酸]](Phenylalanine,[[Phe]]) 12.0±2.3μmol/L

[[异亮氨酸]](Isoleucine,[[Ile]]) 6.5±1.7μmol/L

亮氯酸(Leucine,[[Leu]]) 9.3±2.7μmol/L

[[赖氨酸]](Lysine,[[Lys]]) 22.2±4.3μmol/L

化验结果临床意义
正常情况下CSF中[[氨基酸总量]]约为血浆中含量的10%~30%。在各种[[脑膜炎]]、脊髓阻塞水平以下变黄时,CSF中氨基酸总量明显升高;晚期[[神经梅毒]]轻度升高;[[多发性硬化症]]、老年性[[精神病]]时降低。

CSF中的氨基酸用[[色谱法]]可分离出20余种,氨基酸其临床意义如下。

[[细菌性脑膜炎]]、[[脑膜]]神经根炎、癌脑膜炎、Garin-Bujadox-Bannnarth等CSF谷氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、[[亮氨酸]]、胱氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸含量升高。

[[无菌]]性脑膜CSF中甘氨酸、亮氨酸升高。

[[结核性脑膜炎]]、乙型脑炎、[[脊髓灰质炎]]CSF[[色氨酸]]升高。

[[脑脓肿]]、全身性[[感染]]、[[精神分裂症]]甘氨甘氨酸、谷氨酸、缬氨酸、门冬氨酸含量升高、精神分裂症还可见丙氨酸增高。

[[肝昏迷]]、[[脑出血]]、[[癫痫]]、严重[[嗜睡]]病[[谷氨酰胺]]升高,而癫痫[[患者]]CSF γ-氨基丁酸浓度降低。

许多神经系统[[变性]]病如[[帕金森氏病]]、[[运动神经元病]]、脊髓小脑变性CSF中门冬氨酸升高,谷氨酸降低。

癌症、胶质细胞瘤CSF中赖氨酸、苯丙氨酸浓度增高。

各种[[氨基酸尿症]]患者CSF中的氨基酸可[[发生]]相应的变化,如枫糖尿症CSF中缬氨基、亮氨酸、异亮氨酸等[[支链氨基酸]]含量常增高,精氨酸血症精氨酸含量升高,赖氨酸尿症CSF中赖氨酸增多。 附注
腰椎穿刺CSF后,加入2ml加入磺基[[水杨酸钠]]5mg/ml振荡沉淀蛋白,立即放入冰壶,10h内送入-20℃冰箱或尽快放入-40℃~-70℃[[保存]]。不超过2个月。应避免[[血液]][[污染]](因[[红细胞]]内Asp含量高于血浆的200倍)。要求停止服药[[一周]]后[[采样]]。

采用高效液相色谱仪及[[氨基酸分]]析仪可分离测定出20余种氨基酸。有些报道的正常含量差异甚大,可能由使用仪器,[[方法]]与对[[标本]]处理及贮存条件的不同所致,且在某些疾病的CSF中氨基酸浓度的改变还存在着矛盾,因此CSF中氨基酸的[[测定方法]]与临床意义尚需进一步研究。

CSF中氨基酸含量随年龄增长而升高者有谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、苏氨酸、精氨酸、胱氨酸,但无性别间差异。

相关疾病
神经梅毒、[[梅毒]]、[[多发性硬化]]、结核性脑膜炎、脊髓灰质炎、脑脓肿、精神分裂症、[[昏迷]]、脑出血

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