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《[[中华人民共和国药典]]》（2010年版）[[三部]]附录XIII
== 附录XIII A 无特定病原体鸡胚质量检测要求==
无特定[[病原体]]（SPF）鸡系指在严格[[控制]]饲养条件下，符合所[[规定]]的[[微生物学]][[检测]]要求的鸡。无特定病原体鸡胚是指SPF鸡生产的[[受精]]卵，在符合[[生物制品]]生产的条件下，经[[孵化]]后所生成的鸡胚。通过对SPF鸡蛋和SPF鸡群[[病原微生物]]的检测，使SPF鸡胚质量得以控制。 检测项目与方法
SPF鸡胚病原微生物检测项目和检测[[方法]]见下表。
SPF鸡胚病原微生物检测项目和检测方法
病原微生物
检测要求
检测方法
鸡[[白痢]]沙门菌Salmonella pullorum
●
SPA, IA, TA
禽[[流感病毒]]A型 Avian Influenza Virus （Type A）
●
AGP, HI
[[传染]]性[[支气管]]炎[[病毒]] Infectious Bronchitis Virus
●
AGP, SN, HI
[[传染性法氏囊病病毒]] Infectious Bursal Disease Virus
●
AGP, SN
传染性喉[[气管炎]]病毒 Infectious Laryngotracheitis Virus
●
AGP, SN
[[新城疫病毒]] Newcastle Disease Virus
●
HI
禽[[痘病毒]] Fowl Pox Virus
●
AGP
马立克病病毒 Marek's Disease Virus
●
AGP
副鸡嗜血[[杆菌]] Haemophilus paragallinarum
●
SPA
[[多杀巴斯德菌]] Pasteurella multocida
○
AGP
病原微生物
检测要求
检测方法
禽[[腺病毒]]Ⅲ群（EDS）Avian Adenovirus Group Ⅲ
●
HI
鸡毒支原体 Mycoplasma gallisePticum
●
SPA, HI
[[滑液囊]]支原体 Mycoplasma synoviae
●
SPA, HI
禽脑[[脊髓炎]]病毒 Avian Encephalomyelitis Virus
●
AGP, [[EST]], SN
[[淋巴]][[白血病病毒]] Lymphoid Leukosis vins
●
[[ELISA]]
网状[[内皮]]增生症病毒Reticuloendotheliosis Virus
●
AGP
禽[[呼肠孤病毒]]（病毒性[[关节炎]]）Avian Reovirus
●
AGP
禽腺病毒Ⅰ群 Avian Adenovirus Group I
●
AGP
鸡传染性[[贫血]]病毒 Chicken Infectious Anaemia Virus
●
IFA
【附注】
●必须检测项目，要求阴性；
○必要时检测项目，要求阴性；
SPA，[[血清]]平板凝集试验；
IA，[[病原菌]][[分类]]；
AGP，[[琼脂]][[扩散]]试验；
HI，血凝[[抑制]]试验；
ELISA，酶联[[免疫]][[吸附]]试验；
EST，胚[[敏感]]试验；
SN，血清中和试验；
TA，[[试管凝集试验]]；
IFA．[[间接免疫荧光试验]]。 检测要求
（1）[[取样]] 禽淋巴白血病病毒和禽脑脊髓炎病毒的检测均应取新鲜鸡蛋。其他病原微生物检测一律检测血清，每份供试品血清量应不少于1ml。必须按[[无菌操作]][[程序]]取样，防止[[污染]]。
（2）取样数量 淋巴白血病病毒检测，每个鸡群取鸡蛋200枚（少于200只的鸡群从全群中取样），每只鸡取蛋1枚。禽脑脊髓炎病毒检测，每个鸡群取鸡蛋不少于50枚（少于50只鸡的鸡群应从全群中取样），每只鸡取蛋1枚。其他病原微生物[[感染]]检测，应采取[[随机]]方式取样，抽取每个鸡群的5%，少于200只鸡的鸡群应按10%～15%[[抽样]]。
（3）供试品的[[保存]]与运输 取样后应尽快将供试品送往检测实验室[[检验]]。不能及时运送的供试品，血清须在-15℃以下保存，鸡蛋应在4～10℃保存。保存时间应不超过1周。供试品应有明显的编号标志，并附送检单，写明鸡群名称、鸡群数量、供试品名称及数量。供试品在运送过程中应避免温度上升，防止破损。 结果判定
检测结果如有1项不符合SPF鸡胚微生物学检测指标，则此批送检的鸡胚判为不合格。
== 附录XIII B 实验动物微生物学检测要求==
本标准（引自GB 14922.2—2001）适用于豚鼠、地鼠、兔、犬、猴和[[清洁]]级及以上小鼠、大鼠。 1．实验动物微生物学等级分类
（1）普通级动物Conventional （[[CV]]） Animal 不携带所规定的人兽共患病病原和动物烈性[[传染病]]的病原。
（2）清洁动物Clean.（CL） Animal 除普通动物应排除的病原外，不携带对动物[[危害]]大和对[[科学研究]][[干扰]]大的病原。
（3）[[无特定病原体动物]]Specific Pathogen Free （SPF）Animal 除清洁动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对[[科学]]实验干扰大的病原。
（4）[[无菌动物]]Germ Free （GF） Animal 无可检出的一切[[生命]]体。
2．检测要求
（1）外观指标 动物应外观健康、无异常。
（2）病原菌指标 病原菌指标见表1、表2和表3。
（3）病毒指标 病毒指标见表4、表5和表6。
表1 小鼠、大鼠病原菌检测项目
表2 豚鼠、地鼠、兔病原菌检测项目
表3 犬、[[猴病]]原菌检测项目
表4 小鼠、大鼠病毒检测项目
表5 豚鼠、地鼠、兔病毒检测项目
表6 犬、猴病毒检测项目
== 附录XIII C 实验动物寄生虫学检测要求==
本标准（引自GB 14922.1—2001）适用于地鼠、豚鼠、兔、犬、猴和清洁级及以上小鼠、大鼠。 1．实验动物寄生虫学等级
（1）普通级动物Conventional （CV） Animal不携带所规定的人兽共患[[寄生虫]]。
（2）清洁动物Clean （CL） Animal 除普通动物应排除的寄生虫外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的寄生虫。
（3）无特定病原体动物Specific Pathogen Free （SPF）Animal除普通动物、清沽动物应排除的寄生虫外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的寄生虫。
（4）无菌动物Germ Free（GF）Animal 无可检出的一切生命体。 2．检测要求
（1）外观指标 动物应外观健康，无异常。
（2）[[寄生虫学]]指标 寄生虫学指标见表1、表2和表3。
表1 小鼠和大鼠寄生虫学检测指标
表2 豚鼠、地鼠和兔寄生虫学检测指标
表3 犬和猴寄生虫学检测指标
== 附录XIII D 新生牛血清检测要求==
本[[品系]]从出生14小时内未进食的新生牛[[采血]][[分离]]血清，经除菌[[过滤]]后制成。[[牛血]]清生产过程中不得任意添加其他物质成分。新生牛血清用于生产前应逐批进行以下[[检查]]，并应符合规定。 蛋白质含量
应为3.5%～5.0%（[[2010年版药典三部附录Ⅵ]] B 第一法）。
血红蛋白
用氰化高铁法或其他适宜的方法测定。应不高于0.02%。 大肠杆菌噬菌体
采用噬斑法和增殖法检测。不得有[[噬菌体]]污染。 渗透压摩尔浓度
应为250～400mOsmol/kg（2010年版药典三部附录V H）。 无菌检查
依法检查（[[2010年版药典三部附录Ⅻ]] A），应符合规定。 支原体检查
依法检查（2010年版药典三部附录Ⅻ B），应符合规定。[[细菌]][[内毒素]]检查 应不高于10EU/ml（2010年版药典三部附录Ⅻ E [[凝胶]]限度试验）。 病毒检查 1.细胞培养法
（1）非血吸附病毒检查 将新生牛血清供试品分别接种到人源（如[[人二倍体细胞]]）、猴源（如Vero[[细胞]]）以及[[牛肾]][[传代]]细胞3种细胞，采用的牛肾[[传代细胞系]]应证明无牛病毒的污染。每种细胞至少接种6瓶，每瓶细胞悬液接种量应不少于培养液总量的25%。置36℃±1℃培养21天。接种的每种细胞都应同时设立牛血清阴性对照和病毒阳性对照（阴性对照用牛血清应证明无牛病毒污染）。培养过程中可根据细胞[[生长]]情况更换[[细胞培养]]液，每次更换培养液前应观察有无细胞病变出现。培养到期后，阴性对照应无任何细胞病变出现，阳性对照应出现典型的细胞病变，试验成立。供试品检查不出现任何细胞病变为阴性，符合要求。
（2） 血吸附病毒检查 将上述接种供试品的每种细胞取2瓶进行血吸附病毒检查。用0.2%～0.5%鸡和豚鼠[[红细胞]]混合悬液覆盖于细胞表面，置2～8℃30分钟，[[然后]]置90～25℃[[作用]]30分钟，分别进行镜检，观察红细胞吸附情况，供试品检查结果均应为阴性。试验同时应设立血吸附阳性对照。 2．免疫荧光抗体检查法
采用直接或间接[[免疫荧光抗体]]检查法，至少应对牛[[腹泻]]病毒、牛腺病毒、牛[[细小病毒]]、呼肠孤病毒、[[狂犬病病毒]]以及牛[[副流感病毒]]进行检查，结果均应为阴性。
[[支持细胞]]增殖检查 用Sp2/O-Ag14或适宜的非贴壁传代细胞进行。
（1）细胞生长曲线的测定 取供试品按10%浓度配制细胞培养液，按每1ml含104个细胞的细胞浓度接种细胞，每天计数活细胞，连续观察1周，并绘制生长曲线，细胞的最大增殖浓度应不低于每1ml含106个细胞。
（2）细胞倍增时间的测定 按Sp2/O-Ag14细胞生长曲线计算细胞的倍增时间。取细胞峰值前一天的细胞计数（Y）、接种细胞数（X）及生长时间（T）计算。
细胞的倍增时间应不超过20小时。
（3）[[克隆]]率的测定 按有限稀释法将细胞稀释，并按每孔1个细胞的浓度接种于96孔细胞培养板，每板至少接种48孔，于37℃、5%[[二氧化碳]]条件下培养1周后计算克隆率，应不低于70%。
式中A为细胞生长阳性孔数；
B为接种细胞的总孔数。
== 百科帮你涨知识 ==
[http://www.zk120.com/ji/ 查找更多中医古籍]
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[http://www.zk120.com/fang/ 查找更多方剂]
== 附录XIII A 无特定病原体鸡胚质量检测要求==
无特定[[病原体]]（SPF）鸡系指在严格[[控制]]饲养条件下，符合所[[规定]]的[[微生物学]][[检测]]要求的鸡。无特定病原体鸡胚是指SPF鸡生产的[[受精]]卵，在符合[[生物制品]]生产的条件下，经[[孵化]]后所生成的鸡胚。通过对SPF鸡蛋和SPF鸡群[[病原微生物]]的检测，使SPF鸡胚质量得以控制。 检测项目与方法
SPF鸡胚病原微生物检测项目和检测[[方法]]见下表。
SPF鸡胚病原微生物检测项目和检测方法
病原微生物
检测要求
检测方法
鸡[[白痢]]沙门菌Salmonella pullorum
●
SPA, IA, TA
禽[[流感病毒]]A型 Avian Influenza Virus （Type A）
●
AGP, HI
[[传染]]性[[支气管]]炎[[病毒]] Infectious Bronchitis Virus
●
AGP, SN, HI
[[传染性法氏囊病病毒]] Infectious Bursal Disease Virus
●
AGP, SN
传染性喉[[气管炎]]病毒 Infectious Laryngotracheitis Virus
●
AGP, SN
[[新城疫病毒]] Newcastle Disease Virus
●
HI
禽[[痘病毒]] Fowl Pox Virus
●
AGP
马立克病病毒 Marek's Disease Virus
●
AGP
副鸡嗜血[[杆菌]] Haemophilus paragallinarum
●
SPA
[[多杀巴斯德菌]] Pasteurella multocida
○
AGP
病原微生物
检测要求
检测方法
禽[[腺病毒]]Ⅲ群（EDS）Avian Adenovirus Group Ⅲ
●
HI
鸡毒支原体 Mycoplasma gallisePticum
●
SPA, HI
[[滑液囊]]支原体 Mycoplasma synoviae
●
SPA, HI
禽脑[[脊髓炎]]病毒 Avian Encephalomyelitis Virus
●
AGP, [[EST]], SN
[[淋巴]][[白血病病毒]] Lymphoid Leukosis vins
●
[[ELISA]]
网状[[内皮]]增生症病毒Reticuloendotheliosis Virus
●
AGP
禽[[呼肠孤病毒]]（病毒性[[关节炎]]）Avian Reovirus
●
AGP
禽腺病毒Ⅰ群 Avian Adenovirus Group I
●
AGP
鸡传染性[[贫血]]病毒 Chicken Infectious Anaemia Virus
●
IFA
【附注】
●必须检测项目，要求阴性；
○必要时检测项目，要求阴性；
SPA，[[血清]]平板凝集试验；
IA，[[病原菌]][[分类]]；
AGP，[[琼脂]][[扩散]]试验；
HI，血凝[[抑制]]试验；
ELISA，酶联[[免疫]][[吸附]]试验；
EST，胚[[敏感]]试验；
SN，血清中和试验；
TA，[[试管凝集试验]]；
IFA．[[间接免疫荧光试验]]。 检测要求
（1）[[取样]] 禽淋巴白血病病毒和禽脑脊髓炎病毒的检测均应取新鲜鸡蛋。其他病原微生物检测一律检测血清，每份供试品血清量应不少于1ml。必须按[[无菌操作]][[程序]]取样，防止[[污染]]。
（2）取样数量 淋巴白血病病毒检测，每个鸡群取鸡蛋200枚（少于200只的鸡群从全群中取样），每只鸡取蛋1枚。禽脑脊髓炎病毒检测，每个鸡群取鸡蛋不少于50枚（少于50只鸡的鸡群应从全群中取样），每只鸡取蛋1枚。其他病原微生物[[感染]]检测，应采取[[随机]]方式取样，抽取每个鸡群的5%，少于200只鸡的鸡群应按10%～15%[[抽样]]。
（3）供试品的[[保存]]与运输 取样后应尽快将供试品送往检测实验室[[检验]]。不能及时运送的供试品，血清须在-15℃以下保存，鸡蛋应在4～10℃保存。保存时间应不超过1周。供试品应有明显的编号标志，并附送检单，写明鸡群名称、鸡群数量、供试品名称及数量。供试品在运送过程中应避免温度上升，防止破损。 结果判定
检测结果如有1项不符合SPF鸡胚微生物学检测指标，则此批送检的鸡胚判为不合格。
== 附录XIII B 实验动物微生物学检测要求==
本标准（引自GB 14922.2—2001）适用于豚鼠、地鼠、兔、犬、猴和[[清洁]]级及以上小鼠、大鼠。 1．实验动物微生物学等级分类
（1）普通级动物Conventional （[[CV]]） Animal 不携带所规定的人兽共患病病原和动物烈性[[传染病]]的病原。
（2）清洁动物Clean.（CL） Animal 除普通动物应排除的病原外，不携带对动物[[危害]]大和对[[科学研究]][[干扰]]大的病原。
（3）[[无特定病原体动物]]Specific Pathogen Free （SPF）Animal 除清洁动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对[[科学]]实验干扰大的病原。
（4）[[无菌动物]]Germ Free （GF） Animal 无可检出的一切[[生命]]体。
2．检测要求
（1）外观指标 动物应外观健康、无异常。
（2）病原菌指标 病原菌指标见表1、表2和表3。
（3）病毒指标 病毒指标见表4、表5和表6。
表1 小鼠、大鼠病原菌检测项目
表2 豚鼠、地鼠、兔病原菌检测项目
表3 犬、[[猴病]]原菌检测项目
表4 小鼠、大鼠病毒检测项目
表5 豚鼠、地鼠、兔病毒检测项目
表6 犬、猴病毒检测项目
== 附录XIII C 实验动物寄生虫学检测要求==
本标准（引自GB 14922.1—2001）适用于地鼠、豚鼠、兔、犬、猴和清洁级及以上小鼠、大鼠。 1．实验动物寄生虫学等级
（1）普通级动物Conventional （CV） Animal不携带所规定的人兽共患[[寄生虫]]。
（2）清洁动物Clean （CL） Animal 除普通动物应排除的寄生虫外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的寄生虫。
（3）无特定病原体动物Specific Pathogen Free （SPF）Animal除普通动物、清沽动物应排除的寄生虫外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的寄生虫。
（4）无菌动物Germ Free（GF）Animal 无可检出的一切生命体。 2．检测要求
（1）外观指标 动物应外观健康，无异常。
（2）[[寄生虫学]]指标 寄生虫学指标见表1、表2和表3。
表1 小鼠和大鼠寄生虫学检测指标
表2 豚鼠、地鼠和兔寄生虫学检测指标
表3 犬和猴寄生虫学检测指标
== 附录XIII D 新生牛血清检测要求==
本[[品系]]从出生14小时内未进食的新生牛[[采血]][[分离]]血清，经除菌[[过滤]]后制成。[[牛血]]清生产过程中不得任意添加其他物质成分。新生牛血清用于生产前应逐批进行以下[[检查]]，并应符合规定。 蛋白质含量
应为3.5%～5.0%（[[2010年版药典三部附录Ⅵ]] B 第一法）。
血红蛋白
用氰化高铁法或其他适宜的方法测定。应不高于0.02%。 大肠杆菌噬菌体
采用噬斑法和增殖法检测。不得有[[噬菌体]]污染。 渗透压摩尔浓度
应为250～400mOsmol/kg（2010年版药典三部附录V H）。 无菌检查
依法检查（[[2010年版药典三部附录Ⅻ]] A），应符合规定。 支原体检查
依法检查（2010年版药典三部附录Ⅻ B），应符合规定。[[细菌]][[内毒素]]检查 应不高于10EU/ml（2010年版药典三部附录Ⅻ E [[凝胶]]限度试验）。 病毒检查 1.细胞培养法
（1）非血吸附病毒检查 将新生牛血清供试品分别接种到人源（如[[人二倍体细胞]]）、猴源（如Vero[[细胞]]）以及[[牛肾]][[传代]]细胞3种细胞，采用的牛肾[[传代细胞系]]应证明无牛病毒的污染。每种细胞至少接种6瓶，每瓶细胞悬液接种量应不少于培养液总量的25%。置36℃±1℃培养21天。接种的每种细胞都应同时设立牛血清阴性对照和病毒阳性对照（阴性对照用牛血清应证明无牛病毒污染）。培养过程中可根据细胞[[生长]]情况更换[[细胞培养]]液，每次更换培养液前应观察有无细胞病变出现。培养到期后，阴性对照应无任何细胞病变出现，阳性对照应出现典型的细胞病变，试验成立。供试品检查不出现任何细胞病变为阴性，符合要求。
（2） 血吸附病毒检查 将上述接种供试品的每种细胞取2瓶进行血吸附病毒检查。用0.2%～0.5%鸡和豚鼠[[红细胞]]混合悬液覆盖于细胞表面，置2～8℃30分钟，[[然后]]置90～25℃[[作用]]30分钟，分别进行镜检，观察红细胞吸附情况，供试品检查结果均应为阴性。试验同时应设立血吸附阳性对照。 2．免疫荧光抗体检查法
采用直接或间接[[免疫荧光抗体]]检查法，至少应对牛[[腹泻]]病毒、牛腺病毒、牛[[细小病毒]]、呼肠孤病毒、[[狂犬病病毒]]以及牛[[副流感病毒]]进行检查，结果均应为阴性。
[[支持细胞]]增殖检查 用Sp2/O-Ag14或适宜的非贴壁传代细胞进行。
（1）细胞生长曲线的测定 取供试品按10%浓度配制细胞培养液，按每1ml含104个细胞的细胞浓度接种细胞，每天计数活细胞，连续观察1周，并绘制生长曲线，细胞的最大增殖浓度应不低于每1ml含106个细胞。
（2）细胞倍增时间的测定 按Sp2/O-Ag14细胞生长曲线计算细胞的倍增时间。取细胞峰值前一天的细胞计数（Y）、接种细胞数（X）及生长时间（T）计算。
细胞的倍增时间应不超过20小时。
（3）[[克隆]]率的测定 按有限稀释法将细胞稀释，并按每孔1个细胞的浓度接种于96孔细胞培养板，每板至少接种48孔，于37℃、5%[[二氧化碳]]条件下培养1周后计算克隆率，应不低于70%。
式中A为细胞生长阳性孔数；
B为接种细胞的总孔数。
== 百科帮你涨知识 ==
[http://www.zk120.com/ji/ 查找更多中医古籍]
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