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MLC
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== 英文名==
mixed lymphocyte culture
== MLC的别名==
混合淋巴细胞培养
== 操作名称==
[[MLC]]
== 用品及准备==
基本同[[淋巴细胞毒试验]]。
== 方法及内容==
(1) [[刺激]][[细胞]]的处理：有两种[[方法]]，一种是将受试细胞悬液用60[[Co]]或[[X射线]]40Gy照射后的细胞直接接种。另一种是使用[[丝裂霉素]]处理。向细胞悬液内加入丝裂霉素(终浓度 40mg/ml)，置37℃水浴30min，[[然后]]用RPM1640培养液洗涤3次。最后将细胞悬浮于1640培养液中计数，调整细胞数至1×106/ml。
(2) 准备微量加样器，用75%[[酒精]]、[[无菌]]双蒸水、无菌[[生理盐水]]依次各洗3遍。
(3) 预先准备无菌96孔圆底板，写好标签。
(4) 按照双向和单向混合培养的实验设计接种细胞。①双向微量MLC (混合淋巴细胞培养-D)对照组，[[AA]]、[[BB]]每孔加[[A细胞]] 100μl或[[B细胞]]100μl，实验组：AB每孔加A细胞50μl，B细胞50μl。②单向微量MLC(混合淋巴细胞培养-S)。对照组：AAm、BBm每孔加[[反应]]细胞50μl，自身刺激细胞50μl；实验组：ABm、BAm每孔加反应细胞50μl，刺激细胞50μl，每孔总液量为100μl，每种[[组合]] 3～4个复管。
(5) 培养板置于37℃、含5%CO2湿润空气[[环境]]中培养5d。
(6) 5d后每孔加入2μl(36kBq)3H-TdR，继续37℃培养。
(7) 18h后，用细胞收集器将放射性[[样品]]收集于[[玻璃]][[纤维]]滤纸上，水洗20s，空吸10s。
(8) 将样品滤纸置于60～80℃烤箱[[烘干]]后，移至装有2～3ml闪烁液的[[测量]]杯中，待测。
(9) 用β液体闪烁测量仪，测量每份样品的放射性计数(CPM)。
结果判读
计算刺激指数SI
因本底CPM值都[[控制]]在100以下，故本底CPM值可忽略不计。一般无关个体之间混合淋巴细胞培养的 SI＞10。
正常值
[[形态]]计数法： [[转化率]]＜10% [[同位素]]计数法：[[比较]]cpm得出P＞0.05 。
化验结果意义
肾[[移植]]时，活体供肾者的转化率应＜10%；尸体供肾者的转化率应为＞10%。只能在同一批实验中选用低反应配组。
化验取材
[[血液]]
化验方法
[[细胞免疫]]测定
化验类别
[[免疫学]][[检查]] 细胞免疫测定
参考资料
《新编临床[[检验]]与检查手册》、《新编化验员工作手册》相关文献
== 百科帮你涨知识 ==
[http://www.zk120.com/ji/ 查找更多中医古籍]
[http://www.zk120.com/an/ 查找更多名老中医的医案]
[http://www.zk120.com/fang/ 查找更多方剂]
mixed lymphocyte culture
== MLC的别名==
混合淋巴细胞培养
== 操作名称==
[[MLC]]
== 用品及准备==
基本同[[淋巴细胞毒试验]]。
== 方法及内容==
(1) [[刺激]][[细胞]]的处理：有两种[[方法]]，一种是将受试细胞悬液用60[[Co]]或[[X射线]]40Gy照射后的细胞直接接种。另一种是使用[[丝裂霉素]]处理。向细胞悬液内加入丝裂霉素(终浓度 40mg/ml)，置37℃水浴30min，[[然后]]用RPM1640培养液洗涤3次。最后将细胞悬浮于1640培养液中计数，调整细胞数至1×106/ml。
(2) 准备微量加样器，用75%[[酒精]]、[[无菌]]双蒸水、无菌[[生理盐水]]依次各洗3遍。
(3) 预先准备无菌96孔圆底板，写好标签。
(4) 按照双向和单向混合培养的实验设计接种细胞。①双向微量MLC (混合淋巴细胞培养-D)对照组，[[AA]]、[[BB]]每孔加[[A细胞]] 100μl或[[B细胞]]100μl，实验组：AB每孔加A细胞50μl，B细胞50μl。②单向微量MLC(混合淋巴细胞培养-S)。对照组：AAm、BBm每孔加[[反应]]细胞50μl，自身刺激细胞50μl；实验组：ABm、BAm每孔加反应细胞50μl，刺激细胞50μl，每孔总液量为100μl，每种[[组合]] 3～4个复管。
(5) 培养板置于37℃、含5%CO2湿润空气[[环境]]中培养5d。
(6) 5d后每孔加入2μl(36kBq)3H-TdR，继续37℃培养。
(7) 18h后，用细胞收集器将放射性[[样品]]收集于[[玻璃]][[纤维]]滤纸上，水洗20s，空吸10s。
(8) 将样品滤纸置于60～80℃烤箱[[烘干]]后，移至装有2～3ml闪烁液的[[测量]]杯中，待测。
(9) 用β液体闪烁测量仪，测量每份样品的放射性计数(CPM)。
结果判读
计算刺激指数SI
因本底CPM值都[[控制]]在100以下，故本底CPM值可忽略不计。一般无关个体之间混合淋巴细胞培养的 SI＞10。
正常值
[[形态]]计数法： [[转化率]]＜10% [[同位素]]计数法：[[比较]]cpm得出P＞0.05 。
化验结果意义
肾[[移植]]时，活体供肾者的转化率应＜10%；尸体供肾者的转化率应为＞10%。只能在同一批实验中选用低反应配组。
化验取材
[[血液]]
化验方法
[[细胞免疫]]测定
化验类别
[[免疫学]][[检查]] 细胞免疫测定
参考资料
《新编临床[[检验]]与检查手册》、《新编化验员工作手册》相关文献
== 百科帮你涨知识 ==
[http://www.zk120.com/ji/ 查找更多中医古籍]
[http://www.zk120.com/an/ 查找更多名老中医的医案]
[http://www.zk120.com/fang/ 查找更多方剂]
