MLC
英文名
mixed lymphocyte culture
MLC的别名
混合淋巴细胞培养
操作名称
MLC
用品及准备
基本同淋巴细胞毒试验。
方法及内容
(1) 刺激细胞的处理：有两种方法，一种是将受试细胞悬液用60Co或X射线40Gy照射后的细胞直接接种。另一种是使用丝裂霉素处理。向细胞悬液内加入丝裂霉素(终浓度 40mg/ml)，置37℃水浴30min，然后用RPM1640培养液洗涤3次。最后将细胞悬浮于1640培养液中计数，调整细胞数至1×106/ml。
(2) 准备微量加样器，用75%酒精、无菌双蒸水、无菌生理盐水依次各洗3遍。
(3) 预先准备无菌96孔圆底板，写好标签。
(4) 按照双向和单向混合培养的实验设计接种细胞。①双向微量MLC (混合淋巴细胞培养-D)对照组，AA、BB每孔加A细胞 100μl或B细胞100μl，实验组：AB每孔加A细胞50μl，B细胞50μl。②单向微量MLC(混合淋巴细胞培养-S)。对照组：AAm、BBm每孔加反应细胞50μl，自身刺激细胞50μl；实验组：ABm、BAm每孔加反应细胞50μl，刺激细胞50μl，每孔总液量为100μl，每种组合 3～4个复管。
(5) 培养板置于37℃、含5%CO2湿润空气环境中培养5d。
(6) 5d后每孔加入2μl(36kBq)3H-TdR，继续37℃培养。
(7) 18h后，用细胞收集器将放射性样品收集于玻璃纤维滤纸上，水洗20s，空吸10s。
(8) 将样品滤纸置于60～80℃烤箱烘干后，移至装有2～3ml闪烁液的测量杯中，待测。
(9) 用β液体闪烁测量仪，测量每份样品的放射性计数(CPM)。
结果判读
计算刺激指数SI
因本底CPM值都控制在100以下，故本底CPM值可忽略不计。一般无关个体之间混合淋巴细胞培养的 SI＞10。 正常值
形态计数法： 转化率＜10% 同位素计数法：比较cpm得出P＞0.05 。
化验结果意义
肾移植时，活体供肾者的转化率应＜10%；尸体供肾者的转化率应为＞10%。只能在同一批实验中选用低反应配组。 化验取材
血液 化验方法
细胞免疫测定 化验类别
《新编临床检验与检查手册》、《新编化验员工作手册》相关文献
