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无[[维生素A]]醇及其他杂质[[干扰]]的供试品可用第一法测定，否则应按第二法处理后测 定；如果按第二法处理后，前维生素D峰仍受杂质干扰，仅有维生素D峰可以[[分离]]时，则应按第[[三法]]测定。

对照品贮备[[溶液]]的制备

A<[s]>为内标的峰值。

精密称取供试品适量(相当于维生素D总量600单位以上，重量不超过2.0g)，置[[皂化]]瓶中，加[[乙醇]]30ml、[[抗坏血酸]]0.2g与50％(g／g)[[氢氧化钾]]溶液3ml[若供试量为3g，则加50％(g／g)氢氧化钾溶液4ml]，置水浴上加热回流30分钟，冷却后，自冷凝管顶端加水10ml冲洗冷凝管内壁，将皂化液移至分液漏斗中，皂化瓶用水60～100ml分数次洗涤,[[洗液]]并入分液漏斗中，用不含[[过氧化物]]的[[乙醚]]振摇提取3次，第一次60ml,以后每次40ml，合并乙醚液，用水洗涤数次，每次约100ml，洗涤时应缓缓旋动，避[[免乳]]化,直至水层遇[[酚酞]]指示液不再显红色，静置，分取乙醚提取液，加入[[干燥]]滤纸条少许振摇除去乙醚提取液中残留的[[水分]]，分液漏斗及滤纸条再用少量乙醚洗涤，洗液与提取液合并，置具塞圆底烧瓶中，在水浴上低温[[蒸发]]至约5ml，再用氮气流吹干，迅速精密加入[[甲醇]]3ml，密塞，超声处理助溶后，移入离心管中，离心，取上[[清液]]作为供试品溶液A。

取供试品溶液B，按第一法进行含量测定，进样量为100～200μl。

供试品溶液的制备

在上述第一法的色谱条件下，取对照品溶液与供试品溶液C,交替精密进样200μl，量取维生素D的峰值，按外标法计算含量。