积液溶菌酶
目录
概述
积液中含有数十种酶,溶菌酶就是其中的一种较有诊断意义酶。
积液溶菌酶的医学检查
检查名称
积液溶菌酶
分类
积液溶菌酶的测定原理
根据朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律当光线通过抗原抗体反应系统时,由于溶液中存在抗原抗体复合物,光线被吸收。吸收的量和复合物的量成正比(图1)。
E:吸光度变化率;
Io:入射光;
I:透光度;
C:溶液的浓度;
K:cd或常数;
d:光路长。
(1)沉淀反应免疫比浊法:当抗体过剩时,抗原、抗体最适比值浓度范围大致呈直线。应用紫外波长(340nm)可测定抗原抗体复合物浊度。大多数光电比色计,分光光度计及自动生化分析仪均可用于比浊。
(2)乳胶颗粒被动凝集免疫比浊法:将抗体致敏在乳胶颗粒上,加上抗原时,致敏的乳胶颗粒与抗原相结合,形成大小不等的凝集块。凝集颗粒小时,光可通过;凝集颗粒大时,光散乱,透过光减少。利用此原理,可采用两种方式比浊。
①白色光乳胶颗粒比浊法:乳胶颗粒直径在0.1~0.8μm范围时,粒径大,吸光度增加,用500nm左右波长;0.1μm粒径可用585nm波长进行测定。
②近红外光乳胶颗粒比浊法:与白色光比浊原理相同,粒径0.2μm乳胶颗粒,可用940nm近红外光测定。
试剂
(1)参考标准和抗血清:可选用国内标准化产品,根据其效价进行不同浓度稀释。
(2)稀释液:聚乙二醇(PEG,MW6000)40g,NaF 20g,NaN3 0.5g,NaCl 9g,加蒸馏水溶解并稀释至1000ml,0.45μm滤膜过滤,保存备用。
(3)生理盐水:用0.45μm滤膜过滤。
操作方法
PEG 6000对蛋白质沉淀具有良好的选择性。它与抗血清结合后,再与待测血清中相应抗原发生特异性抗原抗体反应,形成抗原抗体复合物颗粒,悬浮于溶液中,利用透射比浊的原理与标准浓度管相比较,求得未知血清中蛋白质含量。具体方法有二:
(1)相对比浊法:取试管两支,标明测定与标准,加入稀释液后,再加入抗血清,最后加入标本或标准液即可测定。
(2)标准曲线法:用参考标本按已知含量稀释各个数值(一般用五个稀释度),在方格纸上标点划线,纵坐标为“A”值,横坐标为g/L,标本测出“A”值直接查表可获结果。加量见表1。
加完后,颠倒混匀,水浴37℃30min,但C4 CP1h为佳,PA30min后再放4℃过夜,翌日比浊。以稀释液作空白对照,波长495nm,测定“A”值或用722型分光光度计直接显示结果。(相对比浊,先测标准)。如查标准曲线,则以测定管“A”值查得结果。
正常值
胸腹水含量0~5mg/L
胸腔积液/血清<1
化验结果临床意义
对鉴别诊断恶性与结核性胸水有重要意义,94%结核性积液Lzm含量超过30mg/L,P-Lzm/S-Lzm(胸腔积液Lzm/血清Lzm)比值>1明显高于癌性积液、结缔组织病。同时测定胸腔积液中Lzm和LD时,结核性两者均升高,心力衰竭引起的漏出液两者均低、癌性胸腔积液时Lzm低而LD活性高,此种分离现象是癌性胸腔积液的特点。
附注
比浊法易受外界条件的影响,因此,试验条件、试剂浓度、用量等要求一致,混悬液中颗粒大小要均匀,重现性好,否则将影响结果。
相关疾病
腹水、胸腔积液