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细胞色素C活力测定法

添加2,682字节, 2017年3月6日 (一) 03:21
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== 注解==

试剂

(1) [[磷酸]]盐[[缓冲液]](0.2mol/L)

取[[磷酸氢二钠]]71.64g,加水使[[溶解]]成1000ml,作为甲液。另取[[磷酸二氢钠]]27.60g,加水使溶解成1000ml,作为乙液。取甲液81ml与乙液19ml,混匀,调节[[pH值]]至7.3。

(2) 磷酸盐缓冲液(0.1mol/L)

取磷酸盐缓冲液(0.2mol/L)500ml,加水稀释成1000ml,调节pH值至7.3。

(3) 磷酸盐缓冲液(0.02mol/L)

取磷酸盐缓冲液 (0.2mol/L) 100ml,加水稀释成1000ml,调节pH值至7.3。

(4) [[琥珀]]酸盐[[溶液]]

取琥珀酸与[[氢氧化钾]]各4.72g,加水使溶解成100ml,调节pH值至7.3。

(5) [[氰化钾]]溶液 取氰化钾0.65g,加水使溶解成100ml后,用稀[[硫酸]]调节pH值至7.3。

(6) 去[[细胞色素C]]的心悬浮液

取新鲜猪(牛)心2只,除去[[脂肪]]与[[结缔组织]],切成条,用绞肉机绞碎,置纱布兜中,用常水冲洗约2小时(经常搅动,挤[[出血]]色素),挤干,用水洗数次,挤干,置磷酸盐缓冲液(0.1mol/L)中[[浸泡]]约1小时,挤干,重复浸泡1次,用水洗数次,挤干,置[[组织]]捣碎机内,加磷酸盐缓冲液(0.02mol/L)适量恰使猪(牛)心浸没,捣成匀浆,离心10分钟(普通离心机),取上层混悬液,加冰块少量,迅速用稀[[醋酸]]调节pH值至约5.5,立即离心15分钟,取沉淀,加等体积的磷酸盐缓冲液(0.1mol/L),用[[玻璃]]匀浆器磨匀后,贮存于冰箱中;临用时取1.0ml,加磷酸盐缓冲液(0.1mol/L)稀释成10ml.

供试品溶液的制备

取供试品,加水制成每1ml中含细胞色素C约3mg的溶液。
测定法

取磷酸盐缓冲液(0.2mol/L)5ml、 琥珀酸盐溶液1.0ml与供试品溶液0.5ml(如系还原型制剂,应加入0.01mol/L铁氰化钾溶液0.05ml),置25ml具塞比色管中,加去细胞色素C的心悬浮液0.5ml与氰化钾溶液1.0ml,加水稀释至10ml,摇匀,以同样的试剂作空白,照[[分光光度法]],在550nm的波长处附近,间隔0.5nm找出最大[[吸收]]波长,并测定吸收度,直至吸收度不再增大为止,作为酶还原吸收度;[[然后]]各加[[连二亚硫酸钠]]约5mg,摇匀,放置约10分钟,在上述同一波长处测定吸收度,直至吸收度不再增大为止,作为化学还原吸收度;按下式计算。

         酶还原吸收度

细胞色素C活力=───────────×100%

         化学还原吸收度

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