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灵芝多糖
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<b>（一）材料 </b>
1.菌种：湖南省食用菌研究所提供的韩国灵芝母种。
2.种子[[培养基]]：玉米粉2％ 大米粉2％
[[蔗糖]]2％ [[磷酸二氢钾]]o.1g
[[硫酸镁]]0.05％ ph值自然
3.发酵培养基：麦麸浸出液10％ 葡萄糖2％
硫酸铵0.2％
磷酸二氢钾0.2％ ph值自然
<b>（二）方法 </b>
1.种子培养：
2.发酵培养生产[[菌丝体]]。
3.测定干、湿菌丝体。
将发酵液进行离心，然后取其沉淀物，加人60％蔗糖，进行高速（3000转／分）[[密度梯度离心]]5分钟，取上层菌丝体，洗净蔗糖再压干，即得湿菌体，然后再将湿菌体于高温下烘干即为干菌体。分别称取其重量。
4.多糖的提取。
菌丝体[[预处理]]。取适量的灵芝湿菌体，用[[乙醇]]等有机溶剂进行处理，以除去湿菌体中的[[脂类]]物质，同时使[[糖苷酶]]失去活性，防止多糖的降解。
（2）用热水提取多糖。取上面经预处理的灵芝湿菌体，放人1：20的热水（95℃）中浸提，一次小时，连续浸提3次，合并3次的水浸提液减压、浓缩至一定体积，再用3倍体积的95％乙醇混合，静置10-12小时，再离心，最后加入75％的乙醇反复洗涤，以沉淀多糖。此沉淀物为粗多糖，其中混杂有蛋白质、色素、[[低聚糖]]等小分子杂质，一般要经过[[纯化]]。
（3）多糖的纯化，去蛋白质和deae纤维素[[柱层析]]。去蛋白质一般采用sevag法：加入0.2倍多糖溶液体积的[[氯仿]]和0.04倍体积的[[正丁醇]]混合振荡半小时进行分离，直至氯仿与水的界面无沉淀为止，且要重复处理2-3次才能有效除去多糖中的蛋白质。多糖纯化一般采用[[硼酸]]型deae纤维素柱层析法：取脱[[蛋白]]后的多糖，分别以0.025mol／l、0.1mol/l的[[硼砂]]，0.1mol/l的[[氢氧化钠]]溶液进行洗脱，然后用0.2％恿铜[[硫酸]]液[[比色测定]]吸收度，收集有多糖的[[洗脱液]]，再浓缩脱盐即得所需的多糖。
（4）多糖纯度的鉴定。
可用[[电泳法]]进行鉴定，如果存在单一带，说明为纯多糖。
5.多糖与多糖中蛋白质含量的测定：
取一定量菌丝体粗多糖，加水煮沸溶解，用sevag方法脱去蛋白考马斯[[亮兰]]法测其粗多糖中蛋白质和多糖的含量。测得菌丝体中粗多糖含17.01％、多糖含5.43％、蛋白质含量2.16％。
<b>（一）材料 </b>
1.菌种：韩国灵芝栽培种。
2.子实体栽培生产料：木屑78％，米糠20％，蔗糖1％，
[[石膏]]1％，ph值自然。
<b>（二）方法 </b>
1.子实体栽培。
2.灵芝子实体预处理。
3.子实体多糖的提取。
取适量的灵芝子实体，捣碎成粉末，用80目筛过筛，然后用热水提取法进行提取。具体操作同菌丝体多糖的提取。提取出的粗多糖含有色素、蛋白质等小分子杂质，也须除去。
4.去除蛋白质和色素。
子实体粗多糖去除蛋白质也采用se阴法。去除色素，目前尚未发现很理想的方法。一般用乙醇进行反复冲洗，但效果不很理想。
5.多糖纯度的鉴定。
同菌丝体多糖纯度的鉴定。
6.子实体粗多糖、多糖及蛋白质含量的测定。
具体方法同菌丝体多糖及蛋白质含量的测定。测得子实体中粗多糖7.5％、多糖1.5％，蛋白质0.6％，其含量均低于菌丝体中的含量。可见菌丝体阶段就形成了灵芝多糖的有效成分，为灵芝液体深层发酵生产菌丝体提供了科学依据。
[[分类:保健]][[分类:灵芝]]
