弓形虫点免疫金渗滤法

概述

染色试验（MBD）是诊断弓形虫病的可靠和敏感的方法，其在早期感染即出现阳性，并能维持1年之久，但该试验需用活的弓形虫，一般的医学检验室不易进行。补体结合试验阳性反应出现在病程后期并转阴较快，与染色试验结合使用有参考价值，皆因操作繁琐而为间接血凝、荧光抗体和酶免疫吸附测定等法所取代。一些新的测抗体的方法在国内使用尚不普遍。本文主要介绍点免疫金渗滤法。

检查名称

弓形虫点免疫金渗滤法

分类

血清学检查 > 其他

弓形虫点免疫金渗滤法的原理

基本同Dot-ELISA，只是以金标记第2抗体代替酶标记的第2抗体，以肉眼观察结果。

试剂

DIFA试剂盒中的主要组分为一渗滤装置，最简单的形式如图1。扁形塑料小盒（4cm×3cm×0.6cm）中充满吸水垫料（数层叠在一起的滤纸或吸水纸）。小盒分底，盖两部分。盖部中央有直径0.5cm小孔。小孔下紧贴吸水垫料放置一片硝酸纤维素或其他具合适吸附性能的微孔滤膜。闭紧盒盖，即为渗滤装置。

操作方法

DIFA的操作与斑点-ELISA基本相同，只是反应与洗涤通过渗滤完成。以双抗体夹心法测抗原为例，操作过程如下：在渗滤装置的盒盖上膜的中央，点加抗体溶液约1μl，待干（室温约半小时，以后在干燥条件下可长期保存）。以下试验在膜上进行：①加封闭剂2滴（每滴约50μl），待渗入。②加洗涤液2滴，待渗入。③加血清标本1滴，待渗入。④加酶标抗体1滴，待渗入。⑤加洗涤液2滴，待渗入。⑥加底物液1滴，渗入后如反应为阳性，即在膜中央出现着色斑点。⑦加洗涤液2滴，终止反应。每次加液渗入所需时间不到半分钟，整个试验过程可在5min内完成。

正常值

阴性：无色斑点。

化验结果临床意义

抗原的选择将直接影响检测的特异性和敏感性。一般敏感性为92.3%，特异性为99.4%。可用于弓形虫感染的诊断和流行病学调查。

附注

因该法试验需要活的弓形虫，一般临床实验室开展有一定难度。

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