积液腺苷脱氢酶
概述
腺苷脱氨酶是一种核苷氨基水解酶,它广泛存在于全身组织、各种细胞和体液中,在核酸代谢中起重要作用。
积液腺苷脱氢酶的医学检查
检查名称
积液腺苷脱氢酶
分类
积液腺苷脱氢酶的测定原理
ADA催化腺嘌呤核苷水解,生成次黄漂呤核苷和氨,用波氏显色剂测定氨的生成量,间接反映ADA活力。
试剂
(1)腺苷缓冲液(pH 6.8):在45ml去离子水中,加入1mol/L NaOH 4.8ml,煮沸除氨,加入KH2PO4 1.361g溶解,冷至70℃左右,加入腺苷133.6mg,加去离子水至50ml,加氯仿1ml防腐,置冰箱保存。
(2)酚-亚硝基铁氰化钠溶液:取液态酚10ml,加去离子水至500ml,加亚硝基铁氰化钠40mg,置棕色瓶内冰箱保存。若空白管读数增高,应重新配制。
(3)碱性次氯酸溶液:称NaOH 4g溶于0.01mol/L次氯酸溶液中,并加至500ml,置冰箱内长期保存。
(4)氨标准贮存液(1mg/ml):取AR或GR硫酸铵于100~110℃烘干2h,置干燥器内冷却。准确称取0.472g,用去离子水溶解,加浓硫酸0.1ml,再加去离子水至100ml。
(5)氨标准应用液(25μg/ml):取氨标准贮存液2.5ml于100ml容量瓶内,加去离子水至刻度。
操作方法
按表1操作。
混匀,37℃水浴30min,在640nm处,用蒸馏水调零,读取各管吸光度。
正常值
15~20U/L。
化验结果临床意义
在结核性积液中ADA活性升高显著,大于40U/L应考虑为结核性,对结核性胸水诊断的特异性达99%,优于结核菌素试验、细菌学和活组织检查等方法。当经抗结核药物治疗有效时,其胸(腹)水ADA下降,因此可作为抗结核治疗时疗效观察指标。恶性肿瘤、风湿、狼疮性积液亦可升高,漏出液ADA活性低。
附注
(1)0.01mol/L次氯酸溶液可用安替福民溶液稀释而成,其活性氯含量可按下法标定:取安替福民液2ml,蒸馏水约20ml,碘化钾3g,溶解后加入冰醋酸5ml,以可溶性淀粉(1g/L)为指示剂,用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定,根据其用量,计算出安替福民液中活性氯的浓度。
(2)用氯胺T代替次氯酸钠,且前者有效氯浓度高,试剂保存时间长。配方为:NaOH 0.5g,Na2HPO4·12H2O 5.37g,氯胺T 100mg,加水至100ml。置棕色瓶内可保存1年。
(3)配试剂所用蒸馏水均应用去离子水或煮沸去氨以降低空白管吸光度。
(4)上述单位乘以1.19可换算成国际单位浓度(U/L),其依据是:单位×1000/(60×14)。