血清醛缩酶
概述
醛缩酶（ALD或ALS）系果糖-1，6-二磷酸D-甘油醛-3-磷酸裂解酶。该酶以1，6-二磷酸果糖（FDP）为底物，使其分解为3-磷酸甘油醛（GAP）和磷酸二羟丙酮（DAP）；ALD也能以果糖-1-磷酸（F-1-P）为底物，相应地称为FDF ALD和F-1-P ALD。ALD广泛分布于各种动物组织中，其中以骨骼肌的活力最高，脑、心肌、肝次之，血清最低，红细胞中该酶活性比血清高15倍。ALD测定主要有比色法和酶偶联法。
血清醛缩酶医学检查
分类
取材
血液
原理
（1）比色法：ALD可催化底物1，6-二磷酸果糖，分解为GAP和DAP。硫酸肼作捕获剂，与DAP和GAP形成棕。用碘醋酸抑制3-磷酸甘油醛脱氢酶，用碱水解成游离的二羟丙酮和甘油醛，并经分子重排形成甲基乙二醛。最后与酸性2，4-二硝基苯肼作用，生成2，4-二硝基苯腙，在碱性条件下呈紫红色，其颜色深浅与ALD活性呈正相关。
（2）酶偶联法：在反应体系中加入磷酸丙糖异构酶（TPI）使GAP转变为DAP，加入甘油-1-磷酸脱氢酶（GDH）催化DAP还原，同时NADP氧化为NAD＋。根据在340nm吸光度降低的速率，计算ALD活力。
试剂
（1）比色法：
①0.1mol/L三甲基吡啶缓冲液（pH7.4）：称2，4，6-三甲基吡啶1.21g或吸取1.32ml，溶于蒸馏水50ml中，用1mol/L HCl调pH至7.4（约3～4ml），并稀释至100ml。因三甲基吡啶易挥发，应经常校pH。
②0.56mol/L硫酸肼溶液（pH7.4）：称硫酸肼（NH2-NH2·H2SO4）7.29g，溶于60ml 1mol/L NaOH中，调pH至7.4，用水稀释至100ml。
③2mmol/L碘醋酸溶液（pH7.4）：称碘醋酸37mg，溶于0.1mol/L NaOH 2ml中，用水稀释至100ml。
④50mmol/L 1，6-二磷酸果糖底物液（pH7.4）：称取1，6-二磷酸果糖二钠盐384mg，溶于10ml蒸馏水中，用1mol/L NaOH调pH至7.4，以蒸馏水稀释至20ml。冰箱保存可用2周。
⑤100g/L三氯乙酸。
⑥0.75mol/L NaOH溶液。
⑦1g/L DNPH溶液：称取DNPH 100mg，用2mol/L HCl溶解并稀释至100mL。
⑧2g/L二羟丙酮贮存标准液：准确称取二羟丙酮200mg，用蒸馏水溶解并稀释至100ml，置冰箱中48～72h充分解聚后使用。
⑨0.2g/L二羟丙酮应用标准液：将贮存标准液用蒸馏水做10倍稀释。
（2）酶偶联法：
①底物缓冲液：称220mg Na2FDP·8H2O（或370mg三环已氨FDP·H2O），6.2mg碘醋酸，溶于90ml蒸馏水中，加入0.75ml 2，3，6-三甲基吡啶，混合，用5mol/L HCl调pH至7.4（约0.6ml），用蒸馏水稀释至100ml。2～8℃可稳定4周。此液含三甲基吡啶55mmol/L，碘醋酸0.3mmol/L，FDP 4mmol/L。
②15mmol/L NADH溶液：称25mg Na2NADH及20mg NaHCO3，溶于2ml蒸馏水中，2～8℃稳定4周。
③GDH/TPI/LDH悬液（Boehfinger Mannheim公司产品）：用3.2mol/L硫酸铵溶液稀释成混合酶溶液，使各酶浓度为甘油-1-磷酸脱氢酶（GDH）＞75KU/L、磷酸丙糖异构酶（TPI）＞500KU/L，乳酸脱氢酶（LDH）＞233 KU/L（25℃），2～8℃均可稳定1年，用前充分混匀。
操作方法
（1）比色法：按表1操作。
混匀，10min后用540nm波长，蒸馏水调零，读取各管吸光度，以测定管吸光度减去对照管吸光度之差值，查标准曲线求出醛缩酶单位。
附注：
①FDP有各种盐类，称量时应按分子量计算其相当的量。用其钙盐或钡盐时，须先溶于1mol/L盐酸，再逐滴加入饱和硫酸钠溶液，使钙或钡安全沉淀，离心后取上清液用1mol/L NaOH调pH至7.4。最后稀释至规定的容量。
②本法标准曲线不成直线，故不宜作标准管直接计算。
③血清中ALD非常稳定，4℃最少可稳定5天，－20℃可保存6个月。也可用血浆标本，各种抗凝剂均无影响。血细胞中ALD活性很高，应尽快分离标本，勿溶血。
（2）酶偶联法：
①取2.5ml底物缓冲液，0.05ml NADH溶液，0.01ml GDH/TPL/LDH混合酶液，0.2ml血清或血浆，放入比色杯中。
②混合，37℃温育5min。
③在340nm波长读取吸光度A1。
④37℃再准确温育20min后（第2步的5min不算在内），在340nm波长下读取吸光度A2。
⑤若△A（A1-A2）＞0.50，用等渗盐水对标本进行5～10倍稀释后重测。
附注：
①本反应体系中加入LDH以除去内源性丙酮酸的干扰。本法的线性范围至少可达180U/L。
②标本勿溶血，血清置室温可保存48h，4℃可保存3～4周，酶活性无显著变化。
③FDP在4～5mmol/L之间测ALD活性最高，更高的底物浓度可出现抑制现象。
正常值
（1）比色法：成人为5～27U/L，新生儿为成人的4倍，儿童约为成人的2倍。
（2）酶偶联法：男2.61～5.71U/L。女1.98～5.54U/L。
临床意义
（1）肌肉疾病：肌营养不良症、多发性肌炎等患者血清ALD活性升高。在肌营养不良症中，以假肥大型、肢带型和远端型的酶活性最高，肩肱型和眼肌型仅轻度升高或正常。通常，ALD活性随年龄增加而递减，在活动期和肌肉萎缩之前酶活力增高最显著，故其测定有助于本病的诊断。心肌梗死患者血清ALD活力升高，一般在胸痛发作24～48h达高峰，其变化规律与AST相同，但比AST改变要早。心绞痛时则正常。
（2）肝脏疾病：急性病毒性肝炎ALD活性的升降与ALT相平行。慢性肝炎、肝硬化、阻塞性黄疸仅轻度升高。
相关疾病
肝硬化、黄疸
