2010年版药典三部附录XIV
目录
注解
《中华人民共和国药典》（2010年版）三部附录XIV 细菌生化反应培养基
下列各类培养基常用于测定细菌的糖类代谢试验、氨基酸和蛋白质代谢试验、碳源和氮源利用试验等生化反应。
1．糖、醇发酵培养基
（1）成分
基础液
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
0.5%酸性品红指示液 10ml
（或0.4%溴麝香草酚蓝指示液） （6ml）
水 1000ml
糖、醇类
每100ml基础液内各加0.5g
（2）制法 取蛋白胨和氯化钠加入水中，微温使溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入指示液混匀。每100ml分别加入1种糖、醇或糖苷，混匀后分装于小管中（若需观察产气反应，在小管内另放置杜汉小倒管）。于116℃灭菌15分钟。
常用的糖、醇或糖苷：阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、蕈糖、纤维二糖、蜜二糖、棉子糖、松三糖、菊糖、糊精、淀粉、甘露醇、卫矛醇、山梨醇、肌醇、甘油、水杨素、七叶苷等。
（3）用途 鉴别各种细菌对糖类的发酵生化反应，发酵者产酸，培养基变色（加酸性品红者由无色至红色或再至黄色；加溴麝香草酚蓝者由蓝色至黄色）；产气时，小倒管内有小气泡。
2．七叶苷培养基
（1）成分
蛋白胨 5g
七叶苷 3g
磷酸氢二钾 1g
水 1000ml
枸橼酸铁 0.5g
（2）制法 除七叶苷外，取上述成分混合，微温使溶解，加人七叶苷混匀，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于试管中，121℃灭菌15分钟。
（3）用途 用于鉴别细菌对七叶苷的水解试验，产生棕黑色沉淀为阳性反应。
3．磷酸盐葡萄糖胨水培养基
（1）成分
蛋白胨 7g
葡萄糖 5g
磷酸氢二钾 3.8g
水 1000ml
（2）制法 取上述成分混合，微温使溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管中，121℃灭菌15分钟。
（3）用途 用于鉴别细菌的甲基红试验（M-R反应）和乙酰甲基甲醇试验（V-P反应）。
①甲基红试验（M-R反应） 取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，置35℃培养2～5天，于培养管内加入甲基红指示液（称取甲基红0.1g，加95%乙醇300ml，使溶解后，加水至500ml）数滴，立即观察，呈鲜红色或橘红色为阳性，呈黄色为阴性。
②乙酰甲基甲醇生成试验（V-P反应） 取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，置35℃培养48小时，量取2ml培养液，加入α-萘酚乙醇试液（称取α-萘酚5g，加无水乙醇溶解使成100ml）1ml，混匀，再加40%氢氧化钾溶液0.4ml，充分振摇，立刻或数分钟内出现红色，即为阳性反应；无红色反应为阴性，如为阴性反应，置35℃水浴4小时后再观察。
4．蛋白胨水培养基
（1）成分
蛋白胨 10g
水 1000ml
氯化钠 5g
（2）制法 取上述成分混合，微温使溶解，调pH值使蔑菌后为7.3±0.1，分装于小试管．121℃灭菌15分钟。
（3）用途 用于鉴别细菌能否分解色氨酸而产生靛基质的生化反应。
①靛基质试验 取可疑菌落或斜面培养物，接种于蛋白胨水培养基中，置35℃培养24～48小时，必要时培养4～5天，沿管壁加入靛基质试液数滴，液面呈玫瑰红色为阳性，呈试剂本色为阴性。
②靛基质试液 称取对二甲氨基苯甲醛5g，加入戊醇（或异戊醇）75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸25ml徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深。或称取对二甲氨基苯甲醛1g，加入95%乙醇95ml，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸20ml徐徐滴入。
5．三糖铁琼脂培养基
（1）成分
蛋白胨 20g
硫酸亚铁 0.2g
牛肉浸出粉 5g
硫代硫酸钠 0.2g
乳糖 10g
0.2%酚磺酞指示液 12.5ml
蔗糖 10g
琼脂 12～15g
葡萄糖 1g
水 1000ml
氯化钠 5g
（2）制法 除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入琼脂，加热溶胀后，再加入其余成分，摇匀，分装，121℃灭菌15分钟，制成高底层（2～3cm）短斜面。
（3）用途 用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。
方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，做高层穿刺和斜面划线接种，置35℃培养24～48小时，观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性，斜面层变黄色为乳糖、蔗糖发酵阳性；底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。
6．克氏双糖铁琼脂培养基
（1）成分
蛋白胨 20g
枸橼酸铁 0.3g
牛肉浸粉 3g
硫代硫酸钠 0.3g
酵母浸粉 3g
0.2%酚磺酞指示液 12.5ml
乳糖 10g
琼脂 12～15g
葡萄糖 1g
水 1000ml
氯化钠 5g
（2）制法 除乳糖、葡萄糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入琼脂，加热溶胀后，再加入其余成分，摇匀，分装，121℃灭菌15分钟，制成高底层（2～3cm）短斜面。
（3）用途 用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。
方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，做高层穿刺和斜面划线接种，置35℃培养24～48小时，观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性，斜面层呈黄色为乳糖发酵阳性，斜面层呈红色为乳糖发酵阴性；底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。
7．脲（尿素）培养基
（1）成分
蛋白胨 1g
0.2%酚红溶液 6ml
葡萄糖 1g
20%无菌脲溶液 100ml
氯化钠 5g
水 1000ml
磷酸氢二钾 2g
（2）制法 除脲溶液外，取上述成分，混合，调pH值使灭菌后为6.9±0.1，混匀后，121℃灭菌15分钟，冷至50～55℃，加入无菌脲溶液（经膜除菌过滤），混匀，分装于灭菌试管中。
（3）用途 用于鉴别细菌的尿素酶反应。
方法和结果观察：取可疑菌落或少量斜面培养物接种于培养基内，置35℃培养24小时，观察结果。培养基变为红色为尿素酶反应阳性；不变色为阴性，阴性者需延长观察至1周。
8．苯丙氨酸琼脂培养基
（1）成分
磷酸氢二钠 1g
氯化钠 5g
酵母浸膏 3g
琼脂 12～15g
水 1000ml
（或L-苯丙氨酸） （1g）
（2）制法 除琼脂外，取各成分溶于水，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，再加入琼脂，加热溶胀，分装试管，121℃灭菌15分钟，制成长斜面。
（3）用途 用于鉴别细菌的苯丙氨酸脱氨酶试验（也称苯丙酮酸试验）。
方法和结果观察：取斜面培养物，大量接种于苯丙氨酸琼脂斜面，置35℃培养4小时或18～24小时，取4～5滴10%三氯化铁溶液试剂，由斜面上部流下，若出现墨绿色，即为苯丙氨酸脱氨酶试验阳性；倘若不变色则为阴性。
9．氨基酸脱羧酶试验培养基
（1）成分
①基础液
蛋白胨 5g
1.6%溴甲酚紫指示液 1ml
酵母浸出粉 3g
水 1000ml
葡萄糖 1g
⑦氨基酸
L-赖氨酸 0.5g（需加碱溶液溶解）
L-鸟氨酸 0.5g （需加碱溶液溶解）
L-精氨酸 7.5g （不需加碱溶液溶解）
（2）制法
先配制基础液备用；将溶解后的3种氨基酸，各分别加至100ml基础液（使氨基酸的终浓度为0.5%），混匀，调pH值使灭菌后为6.8。分装于小试管中，每管2.5ml并滴加1层液体石蜡；同时分装一部分基础液于小试管，作为对照培养基，均置116℃灭菌10分钟。
（3）用途 用于鉴别细菌的脱羧酶、双水解酶试验。方法和结果观察：取疑似菌斜面培养物分别接种于上述3种培养基及基础液对照培养基，置35℃培养24～48小时。在培养初期由于待检细菌发酵葡萄糖产酸，试验培养基和对照培养基应呈黄色，继续培养时，试验培养基如呈紫色或紫红色，即为阳性反应；如至培养末期，培养基仍同对照管呈黄色，则判为阴性反应。
10．明胶培养基
（1）成分
蛋白胨 5g
明胶 120g
牛肉浸出粉 3g
水 1000ml
（2）制法 取上述成分加入水中，浸泡约20分钟，加热溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管中，121℃灭菌15分钟。
（3）用途 用于细菌的明胶液化试验。
方法和结果观察：取少量待检菌斜面培养物穿刺接种于明胶培养基内，置35℃培养24小时，取出置冰箱内10～20分钟。如培养基仍呈溶液状，则为阳性；培养基重新凝固，则为阴性。细菌液化明胶之作用有时甚为缓慢，如未见液化，需继续培养1～2周方可确定阴性。
11．丙二酸钠培养基
（1）成分
酵母浸出粉1g
磷酸二氢钾 0.4g
氯化钠 2g
丙二酸钠 3g
葡萄糖 0.25g
0.4%溴麝香草酚蓝指示液6ml
硫酸铵 2g
水 1000ml
磷酸氢二钾 0.6g
（2）制法 除指示液外，将上述成分溶解，调pH值使灭菌后为6.8．再加入指示液。分装小管中，121℃灭菌15分钟。
（3）用途 用于鉴别细菌能否利用丙二酸钠作为碳源而生长繁殖。
方法和结果观察：取斜面或肉汤培养物接种于丙二酸钠培养基内，置35℃培养48小时。于24小时和48小时后各观察1次结果。培养基颜色由绿色变成蓝色为阳性反应；无颜色变化，或由绿色变成黄色，则为阴性反应。
12．枸橼酸盐培养基
（1）成分
氯化钠 5g
枸橼酸钠（无水） 2g
硫酸镁 0.2g
1.0%溴麝香草酚蓝指示液10ml
磷酸氢二钾1g
琼脂 14g
磷酸二氢铵1g
水 1000ml
（2）制法 除指示液和琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调pH值使灭菌后为6.9±0.1，加入琼脂，加热溶胀，然后加入指示液，混匀，分装于小试管中，121℃灭菌15分钟，制成斜面。
（3）用途 用于鉴别细菌能否利用枸橼酸盐作为碳源和氮源而生长繁殖。
方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，接种于枸橼酸盐培养基的斜面上，一般培养48～72小时，凡能在培养基斜面生长出菌落，培养基即由绿色变成蓝色者为阳性反应；无菌落生长，培养基仍绿色者为阴性反应，阴性反应者应继续培养观察至7天。
13．硝酸盐胨水培养基
（1）成分
蛋白胨 10g
硝酸钾 2g
酵母浸出粉 3g
水 1000ml
（2）制法 取上述成分，加热溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管中，121℃灭菌15分钟。
（3）用途 用于鉴别细菌能否还原硝酸盐成亚硝酸盐。
方法和结果观察：取待检菌培养物接种于硝酸盐胨水培养基中，置35℃培养24小时。将下列甲液和乙液于用前等量混合，每个培养物加混合物0.1ml，产生红色为阳性反应，不产生红色为阴性反应。
甲液：称取α-萘胺5g，溶解于5mol/L醋酸1000ml中。乙液：称取磺胺酸（对氨基苯磺酸）8g，溶解于5mol/L醋酸1000ml中。
14．石蕊牛奶培养基
（1）成分
脱脂奶粉 10g
水 100ml
10%石蕊溶液 0.65ml
（2）制法 取上述成分混匀后，分装于小试管中，116℃灭菌10分钟。
15．半固体营养琼脂培养基
（1）成分
蛋白胨 10g
琼脂 4g
牛肉浸出粉 3g
水 1000ml
氯化钠 5g
（2）制法 除琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调pH值使灭菌后为7.2±0.2，再加入琼脂，加热溶胀，分装于小管中，121℃灭菌15分钟后，直立放置。待凝固后备用。 （3）用途 用于观察细菌的动力，也可用于一般菌种的保存。
细菌动力检查：取疑似菌斜面培养物穿刺接种于半固体营养琼脂培养基中，置35℃培养24小时，细菌沿穿刺外周扩散生长，为动力阳性；否则为阴性。阴性者，应再继续培养观察2～3天。
