鲎试验

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检测内毒素血症的一种试验。鲎系海边栖生的一种大型节肢动物,属蜘蛛纲。其多功能血细胞(变形细胞)的溶解物中含有一种可凝性蛋白质,在极微量内毒素(0.0005vg/ml)存在时可形成凝胶。本试验即利用此原理测定血液或其他样品中的微量内毒素。在临床病例,下列疾病阳性率较高:内毒素性休克急性化脓性胆管炎、重症肝炎腹膜炎肝硬化等。内毒素检出阳性病例中约有2/3导致死亡。

鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的兰色血液中提取变形细胞溶解物,经低温冷冻干燥而成的生物试剂,专用于细菌内毒素检测。鲎试剂因能与细菌内毒素及β-葡聚糖反应形成凝胶而被广泛用于检测食品、水源、药品、医疗器械、动物体液等不同样品中的内毒素。使用鲎试剂检测的试验称为鲎试验。根据鲎试剂反应的原理可分为定性鲎试剂和定量鲎试剂,对应的试验称定性鲎试验和定量鲎试验。定性鲎试验主要用于药品,医疗器械等产品的内毒素定性检验。定量鲎试验主要用于检测临床病人、动物体内内毒素等方面,以便为医生用药提供参考。

鲎试验按方法分:

凝胶法

动态浊度

终点浊度法

动态显色法

终点显色法

凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.5ml/支或者更大装量,使用时应加除热原水(细菌内毒素检查用水)复溶后使用。凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。此法操作比较简单,经济,不需要专用测定设备,可以进行定性或半定量测定。

动态浊度法、终点浊度法、动态显色法、终点显色法,这四种方法都是定量检测内毒素的。

根据检测原理,终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。终点浊度法未见商品化产品。动态浊度法(又称动态比浊法)是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间,或是检测浊度增加速度的方法。

终点显色法和动态显色法都是属于显色基质法。显色基质法系利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物显色释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量的方法,根据产物颜色判断内毒素浓度,又称为比色法。厦门鲎试剂厂于2005年推出以鲎四为显色底物的鲎试剂盒,抗干扰能力强, 灵敏度高达0.005EU/ml, 质量达到国际领先水平。目前已有500多家单位使用该试剂盒,并有部分单位发表相应文献。国内有少量国外产品,但价格远高于国产试剂,到货周期长。

如果您仅需要检测样品的内毒素限量,可以选择凝胶法鲎试剂,通过确定内毒素限值及最大有效稀释倍数,做样品的干扰试验从而确定使用的鲎试剂的灵敏度。

如果您需要定量测定样品中内毒素含量则应选择显色基质鲎试剂盒或动态浊度法鲎试剂。

动态浊度法与动态显色法需要带温育系统的动态光度测定仪器及配套软件,例如,微板鲎试仪ELx808及软件TALgent 或Gen5。动态浊度法与动态显色法简单方便、一步即成,线性范围宽。

终点显色法需要配套酶标仪或可见分光光度计进行检测。配套带有温育系统的酶标仪,如微板鲎试仪ELx808,可减少试剂用量。

标本采集

用经处理过的,无热源,无污染试管取血2ml送检。

正常值范

阴性反应。

临床意义

阳性者,见于标本中含有内毒素,可认为被细菌污染过。


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