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== 尿游离皮质醇的医学检查==
(1)0.1mol/L pH7.0[[磷酸]]-[[氯化钠]][[缓冲液]](PBS)0.2mol/L NaH2PO4·2H2O 100ml,0.2mol/LNa2HPO4·12H2O 400ml,NaCl 9g,加水至1000ml。
(7)氚标皮质醇:[1,2-3H]皮质醇,比活性([[SA]])=148×1016Bq/mmol(40Ci/mmol),放化纯度>95%。工作液用无水[[乙醇]]配成7000cpm/10μl,密封,贮存于4℃。
(8)皮质醇标准液:上海第九制药厂[[层析]]纯,工作液用无水乙醇配成2ng/100μl,密封,4℃保存。 === 操作方法===
(1)尿样品测定:取万分之一的24h混合尿,用[[蒸馏水]]稀释至0.5ml,于10ml抽提管中,加[[二氯甲烷]]5ml和0.1mol/L NaOH 0.2ml,抽提5min,静止片刻弃去上层液,下层二氯甲烷抽提液用水洗2次,每次1ml,摇1min,离心1500r/min 3min,弃去水层,取二氯甲烷提取液双份各1ml(复管),45℃压缩空气吹干,加3H-皮质醇7000cpm/10μl,45℃吹干,各管加0.2ml抗体应用液(1∶3800用1g/L GPS稀释),摇匀置4℃过夜,以下步骤同标准管。
(2)标准曲线制作:0,0.1,0.3,0.6,1.0,2.0,4.0ng(各点做复管),各管加3H-皮质醇10ml,吹干,每管加抗体0.2ml,另取四管各加3H皮质醇10ml,分别加1g/L GPS 0.7和0.2ml其中二管作总[[脉冲]]测定管,另二管作非[[特异性]]测定(BN%)摇匀后,放4℃过夜。次日各管加5g/L GPS 0.1ml摇匀,再加2.5g/L DCC 0.5ml(总管T不加)。[[分离]]游离与结合物;摇匀4℃停放10min,3000r/min离心10min吸取上[[清液]]0.4ml,加到8ml闪烁液中,混旋1min,避光4h后,用液烁计数仪[[测量]]。
(1)皮质醇增多增多症:血浆和尿皮质醇明显升高,血浆昼夜节律变化消失。
(6)[[单纯性肥胖]]、血浆和尿皮质醇含量略高或正常范围内。
(7)[[先天性肾上腺皮质增生症]],因体内缺少某种酶如C20-22断裂酶3β-脱氢酶、17α-羟化酶11β羟化酶和18羟化酶等使皮质醇合成障碍,而皮质醇产生减少。 === 附注===
(1)各管加入3H或标准必须吹干,[[然后]]加抗体,因为3H或标准是乙醇配制,否则会损害抗体。
(2)加定量的3H[[须根]]据实验情况而定(本文加7000cpm),在相应的范围内3H抗原加入量越少[[灵敏度]]就越高。 === 相关疾病===
肺癌、先天性肾上腺皮质增生症