尿C肽
目录
概述
同CP不受外源性胰岛素及胰岛素抗抗体干扰,故判断B细胞功能最真实、最全面、最敏感的指标之一。
尿C肽的医学检查
检查名称
尿C肽
分类
化验取材
尿C肽的测定原理
放射性标记物125I-CP和标本(或标准品)中的C肽与有限的C肽抗体竞争性结合,达到平衡后,加入分离剂,测定沉淀物中放射活性,与标本中C肽含量成负相关。
试剂
(1)0标准品:含硫柳汞的BSA硼酸盐缓冲液(冻干)。用20ml蒸馏水或去离子水溶解,静置15~20min直至完全溶解。用前充分混匀,溶解后的试剂放-15℃以下保存。
(2)人胰岛素C-C-肽标准品:人胰岛素C-C-肽标准品溶于含稳定剂的BSA-硼酸盐缓冲液中(冻干)浓度范围0.6~20ng/ml,用方法B,还需一低浓度标准品0.15ng/ml,每瓶标准品用1ml蒸馏水或去离子水溶解,静置15~20min直至完全溶解,用前充分混匀,溶解后的试剂放-15℃以下保存。
(3)兔抗胰岛素C-C-肽血清:兔抗胰岛素C-C-肽血清溶于含硫柳汞的BSA-硼酸盐缓冲液中(冻干),已加绿色染料,用14ml蒸馏水或去离子水溶解,静置室温15~20min直至完全溶解,用前充分混匀。溶解后的试剂放-15℃以下保存。
(4)125I胰岛素C-C-肽:125I标记的人胰岛素C-C-肽溶于含硫柳汞的BSA-硼酸盐-EDTA缓冲液中(冻干)。用14ml蒸馏水或去离子水溶解,静置15~20min,直至完全溶解,用前充分混匀,溶解后的试剂放-15℃以下保存。
(5)羊抗兔抗体与沉淀混合液(GAR-PPT):羊抗兔抗血清与PEG混合溶于含防腐剂的BSA-硼酸盐缓冲液中(冻干)。用35ml蒸馏水或去离子水溶解。充分混匀直至悬浊液混合均一,然后置室温至少30min并不断混匀,溶解后的试剂放-15℃以下保存。
(6)质控血清(质控-Ⅰ、质控-Ⅱ):含NaN3和其它稳定剂(冻干),用1.0ml蒸馏水或去离子水溶解、混匀,置室温15~20min,直至完全溶解,用前充分混匀,将质控血清当作未知标本进行测定,每批的具体数值可从各试剂的质控图上找到。溶解后的试剂放-15℃以下保存。
(7)PEG(25%)。
2~8℃以下保存。
操作方法
(1)方法1:
①溶解冻干的试剂或将冻存的试剂彻底复融,操作温度不得高于25℃,用前轻轻混匀。
②将试管编号,均做双管。
③加入试剂:
A.总计数管:放置一旁至步骤④。
B.非特异性结合管(NSB):100μl 0标准品。
C.0标准品:100μl 0标准品+200μl兔抗胰岛素C-C-肽血清。
D.胰岛素C-C-肽标准品(A-E):100μl标准品+200μl兔抗胰岛素C-C-肽血清。
E.质控和待测标本:100μl血清或尿标本+200μl兔抗胰岛素C-C-肽血清。
④每管加200μl 125I胰岛素C-C-肽。
⑤轻轻混匀,试管中不能产生气泡,2~8℃孵育16~24h。
⑥沉淀剂用前充分混匀,除总计数管外每管加500μl沉淀剂。
⑦轻轻混匀,试管中不得有气泡,20~25℃孵育15~20min。
⑧在20~25℃以760×g离心20min。
⑩用γ计数器计数沉淀和总计数管。
(2)方法2:
①溶解冻干的试剂或将冻存的试剂彻底复融。操作温度不得高于25℃,用前轻轻混匀。
②将试管编号,均做双管。
③加入试剂。
A.总计数管:放置一旁至步骤⑤。
B.非特异性结合管(NSB):100μl 0标准品。
C.0标准品:100μl 0标准品+200μl兔抗胰岛素C-C-肽血清。
D.胰岛素C-C-肽标准品(A-E):100μl标准品+200μl兔抗胰岛素C-C-肽血清。
E.质控和待测标本:100μl血清或尿液标本+200μl兔抗胰岛素C-C-肽血清。
④2~8℃孵育16~24h。
⑤每管加200μl 125I胰岛素C-C-肽。
⑥轻轻混匀,不得有气泡,2~8℃孵育16~24h。
⑦沉淀剂用前充分混匀,除总计数管外,每管加500ml。
⑧轻轻混匀,不得有气泡,20~25℃孵育15~25min。
⑨在20~25℃以760×g离心20min。
⑩倾出管内上清液(总计数管除外),用吸水纸吸干。
⑪用γ计数器计数沉淀和总计数管。
正常值
45~117μg/24h。
化验结果临床意义
(2)降低:1型糖尿病。
附注
留尿送检时,并需注明是否用胰岛素治疗。
相关疾病
1型糖尿病、糖尿病