羊水胆红素
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概述
羊水中的胆红素系由胎儿红细胞破坏产生的。进入羊水的途径可能是通过肺或皮肤，多是未结合型胆红素，早期妊娠时羊水中胆红素含量高。随着胎儿肝脏功能逐渐成熟及完善，胎儿体内的结合胆红素逐渐增多，使羊水中的未结合胆红素逐渐减少，在妊娠晚期、末期时浓度极低，甚至为0。由于含量过少，用一般化学方法不易检出，需用吸光度差测定。
羊水胆红素的医学检查
检查名称
羊水胆红素
分类
取材
羊水
羊水胆红素的测定原理
羊水中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，产生偶氮胆红素；在同样条件下，游离胆红素须有加速剂使胆红素氢键破坏后与重氮试剂反应。咖啡因、苯甲酸钠为加速剂，醋酸钠维持pH同时兼有加速作用。抗坏血酸（或叠氮钠）破坏剩余重氮试剂，中止结合胆红素测定管的偶氮反应。加入碱性酒石酸钠使最大吸光度由530nm转移到598nm，非胆红素的黄色色素及其他红色与棕色色素产生的吸光度降至可忽略而不计，使灵敏度和特异性增加。最后形成的绿色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。
试剂
（1）咖啡因试剂：无水醋酸钠82g，苯甲酸钠75g，乙二胺四乙酸二钠（EDTANa2）1.0g溶于约500ml的蒸馏水中，再加入咖啡因50g，搅拌至完全溶解，然后加蒸馏水稀释至1000ml，过滤后置棕色试剂瓶中，室温保存可稳定6个月。
（2）碱性酒石酸钠溶液：氢氧化钠75g，酒石酸钠（Na2C4H4O6·2H2O）263g，加蒸馏水溶解并稀释至1000ml，混匀，置塑料瓶中，室温保存可稳定6个月。
（3）0.725mol/L亚硝酸钠溶液：亚硝酸钠5.0g，加蒸馏水溶解并稀释至100ml，置棕色瓶中，塞紧，4℃保存。若发现溶液呈淡黄色时，应丢弃重配。
（4）28.9mmol/L对氨基苯磺酸溶液：对氨基苯磺酸5g，加蒸馏水800ml，加浓盐酸15ml，待完全溶解后，加蒸馏水至1000ml。
（5）重氮试剂：临用前，取亚硝酸钠应用液0.5ml加对氨基苯磺酸溶液20ml混合。
（6）5g/L叠氮钠溶液：称取叠氮钠0.5g，用蒸馏水溶解并稀释至100ml。
（7）胆红素标准液：
①目前一般用游离（非结合）胆红素配制标准液，因此配制标准液的稀释剂需含白蛋白。用人血清白蛋白太昂贵，可用牛血清白蛋白（40g/L）或人血清作替代物。后者方法如下：
羊水必要时可用滤菌器过滤。取过滤后的羊水1ml，加入24ml新鲜生理盐水混合。在414nm波长，1cm光径，以生盐水调零点，其吸光度应小于0.1；在460nm的吸光度应小于0.04。
②配制标准的胆红素需符合下列标准：纯胆红素的氯仿溶液，在25℃条件下，光径1.000±0.001cm，波长453nm，摩尔吸光系数应在60700±1600范围内，改良J-G法偶氮胆红素的摩尔吸光系数应在74380±866。
③羊水贮存标准液，171μmol/L（10mg/dl）：准确称取符合标准的胆红素10mg，加入1ml二甲亚砜，用玻璃棒搅拌，使成混悬液。加入0.05mol/L碳酸钠溶液2ml，使胆红素完全溶解后，移入100ml容量瓶中，用稀释羊水洗涤数次并入容量瓶中，缓慢加入0.1mol/L盐酸2ml，边加边摇（勿用力摇动，以免产生气泡）。最后以稀释用羊水补足至100ml。配制过程中应尽量避光，贮存容器用黑纸包裹，置4℃冰箱3天内有效，但要求配后尽快作标准曲线。
操作方法
表1。
充分混匀后，波长600nm，对照管调零，读取各管吸光度；或用水调零，读取测定管及对照管吸光度，用测定管吸光度与对照管吸光度之差值（Au-Ac）在标准曲线上查出相应的胆红素浓度。
正常值
早期妊娠：＜1.28μmol/L （＜0.075mg/dl）
足月妊娠：＞0.43μmol/L （＞0.025mg/dl）
化验结果临床意义
在有溶血性疾病时，此项可作为观察指标，以决定是否继续观察，宫内输血、引产。妊娠后期继续升高，表示胎儿有胎内溶血症。当孕妇患有血胆红素增高（肝炎、溶血性贫血、胆汁淤积）或服用某些药物（酚噻嗪）时，则可出现羊水胆红素伪增。
附注
标本采集后应立即送检，因日光下时间暴露使测定结果明显降低。
相关疾病
溶血性贫血
