血清白细胞介素8
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概述
IL-8是一种低分子量(6~8kD)的多肽,单核细胞、淋巴细胞、纤维母细胞、内皮细胞等多种细胞受LPS、TNF或IL-1刺激后都可产生这种细胞因子。IL-8的特征性生物效应是趋化和激活中性粒细胞,因而参与中性粒细胞介导的组织损伤。在许多慢性炎症性疾病,如类风湿性关节炎、银屑病等,病变局部或血清IL-8产生异常,定量检测IL-8对于研究这些疾病的发生、发展及指导治疗均有重要意义。
血清白细胞介素8的医学检查
检查名称
血清白细胞介素8
分类
取材
血清白细胞介素8的测定原理
鉴于生物学检测的局限性,近年来发展了ELISA和放射免疫法检测IL-8含量。目前国外已有商品化的ELISA试剂盒或特异的IL-8多抗和单抗。国内北医免疫教研室等也成功地制备了基因重组IL-8,为制备IL-8多抗或单抗创造了条件。下面介绍Deforge等(1991)建立的ELISA测定法。
试剂
(1)兔抗IL-8IgG。
(2)生物素化的兔抗IL-8IgG。
(3)亲和素-HRP。
(4)rIL-8标准品。
操作方法
(1)包被兔抗人IL-8IgG(1μg/ml),以碳酸盐缓冲液稀释,加入酶标板各孔中,50μl/孔。4℃过夜。
(2)封闭 用洗液(PBS-0.05% Tween20)洗板3次,加入封闭液(含2%牛血清白蛋白的PBS)200μl/孔,37℃2h。
(3)加样 加入待检样品和系列稀释的rIL-8标准品,50μl/孔,所有样品及各稀释度标准品均为复孔或三孔,37℃1h。
(4)洗板3次,加入生物素化兔抗IL-8IgG(35μg/ml)50μl/孔,37℃温育30min。
(5)洗板3次,加入1∶5000稀释的亲和素-HRP,100μl/孔,37℃温育30min。
(6)洗板3次,加入底物液100μl/孔,室温显色5min,每孔加入50μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(7)用酶标仪测A490nm。
正常值
ELISA:8.1~21.3μg/L。
化验结果临床意义
附注
该法特异性强,敏感度高。最小检出量约为100pg/ml,重复性好。其关键在于制备高效价,高纯度的兔抗IL-8 IgG。
相关疾病
类风湿性关节炎、银屑病、肾病综合征