血小板抗原鉴定

操作名称

血小板抗原鉴定

待检血小板悬液，已知血小板抗体血清，离心机，U型96孔反应板，福马林，聚山梨酯 20，胎牛血清，兔抗人IgG，IgG抗D致敏红细胞。

1．将ACD-A与新鲜待检血液按1：7混匀，以800r/min离心10-15min，获得富含血小板血浆后加入该血浆量的1/10 ACD混匀，再以3000r/min离心15min，取压积血小板用生理盐水洗涤2次，最后配成100×109/L血小板悬液。

2．取U型反应板每孔加入25μl血小板悬液，水平振荡15s以1500r/min离心反应板5min，然后加入50μl 8％-12％的福马林 (pH7.2磷酸盐缓冲液稀释甲醛)，室温温育固定20min，然后取出反应板，用生理盐水洗涤5—6次。

3．每个反应孔加入已知血小板抗体的血清25μl，置于室温混匀温育1h，用0.05％聚山梨酯20PBS洗涤反应板6次，每个孔内加入兔抗人IgG25μl，温育30min，加入1％抗D致敏红细胞25μl，反应板置于湿盒内静置2h后或次日观察结果。

离心时温度不能太高，以免破坏血小板抗原性；操作台上应加湿布，以防静电干扰；反应板温育过程中，应置于湿度适合的环境中，以防孔内干涸影响结果判读。

U型反应板底部红细胞呈均匀散在的膜状者为阳性，表示待检血小板含有与加入已知血小板抗体相对应的血小板抗原，若红细胞沉积在反应板底部为阴性，表示待检血小板不含加入抗体相对应的抗原。

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