血清脂蛋白和血清脂蛋白电泳
目录
概述
脂蛋白电泳主要用于高脂蛋白血症分型，也有助于了解冠心病的血脂状态，更好地指导临床诊疗工作。
血清脂蛋白和血清脂蛋白电泳的医学检查
检查名称
血清脂蛋白和血清脂蛋白电泳
分类
取材
血液
血清脂蛋白和血清脂蛋白电泳的测定原理
脂蛋白是在碱性pH条件下，以琼脂糖凝胶或醋酸纤维条带作为载体，从阳性方向来进行分离的。形成的蛋白区带可以用脂肪染料如苏丹黑或者油红染色，它们只用于脂蛋白染色。在琼脂中可能会有附加的聚阴离子和二价阳离子沉淀。脂蛋白沉淀带用光密度计可立即定量分析。脂蛋白区带也可以被切开后重新溶解，对各区带进行胆固醇浓度的直接酶法检测。另外，有报道在用薄层琼脂糖凝胶上进行电泳分离后，可直接检测各脂蛋白组分中的胆固醇含量的方法。
试剂
（1）巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH 8.6±0.1、μ＝0.06）：以巴比妥2.21g、巴比妥钠12.36g于500ml蒸馏水中，加热溶解，待冷却至室温后加蒸馏水至1000ml。
（2）染色液：
①丽春红S染色液：丽春红9.04g、三氯醋酸6g，用蒸馏水溶解，并稀释至100ml。
②氨基黑10B染色液：氨基黑10B 0.1g，溶于无水乙醇20ml中，加冰醋酸5ml，甘油0.5ml使溶解。然后将磺柳酸2.5g，溶于少量蒸馏水中，加入前液，再以蒸馏水补足至100ml。
（3）漂洗液：
①30ml/L醋酸溶液：用于丽春红染色的漂洗。
②甲醇45m，冰醋酸5ml和蒸馏水50ml混匀。用于氨基黑10B染色的漂洗。
（4）透明液：柠檬酸（C6H5Na3O7·2H2O）21g和N-甲基-吡咯烷酮150g，用蒸馏水溶解，并稀释到500ml。亦可选用氢萘或液体石蜡透明。
（5）0.4mol/L氢氧化钠溶液或0.1mol/L氢氧化钠溶液。
操作方法
（1）将缓冲液加入电泳槽内，调节两侧槽内的缓冲液，使其处于同一平面。
（2）醋酸纤维素薄膜的准备：取醋酸纤维素薄膜（2cm×8cm）在毛面的一端（负极侧）1.5cm处用铅笔轻划一横线，做点样标记。编号，并标明正、负极后，将薄膜置于巴比妥-巴比妥钠缓冲液中浸泡，待充分浸透后（一般为20min）取出，夹于洁净滤纸中间吸去多余的缓冲液。
（3）将醋酸纤维素薄膜毛面向上贴于电泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取无溶血血清3～5μl于横线处沿横线加样，样品应与薄膜的边缘保持一定的距离，以免电泳图谱中的蛋白区带变形，待血清渗入薄膜后，反转薄膜，使光面朝上，平直地贴于电泳槽支架上，用双层滤纸或四层纱布将薄膜的两端与缓冲液连通，稍待片刻。
（4）接通电源，注意醋酸纤维素薄膜上的正、负极，切勿接错。电压90～150V，电流0.4～0.6mA/cm（不同的电泳仪所需电压，电流可能不同，应灵活掌握），夏季通电45min，冬季通电时间稍长，约为60min，电泳区带展开约25～35mm即可。
（5）染色：通电完毕，取下薄膜直接浸于丽春红S染液或氨基黑10B染色液中，染色5～10min（以白蛋白区带染透为止），然后在漂洗液中漂去剩余染料，直至背景无色为止。
（6）定量：
①比色法：将漂洗的薄膜吸干，剪下各染色的蛋白区带入相应的试管中，在白蛋白管中加0.4mol/L氢氧化钠6ml（计算时吸光度乘以2），其余各管加3ml，振摇数次，置37℃水箱20min使其色泽浸出。氨基黑10B染色用分光光度计在620nm处读取各管吸光度，然后计算出各管的含量（同时做空白管对照）。
丽春红S染色时浸出液用0.1mol/L氢氧化钠，加入量同上法。10min后，白蛋白管内加400ml/L醋酸0.6ml（计算吸光度时乘以2），其余各管加0.3ml，以中和部分氢氧化钠，使色泽加深，必要时离心，取上清液用分光光度计在520nm处读取各管的吸光度（同时作空白对照），然后计算各自的含量。
②光密度计扫描法：A.透明：吸去薄膜上的漂洗液（为防止透明液被稀释影响透明结果），将薄膜浸入透明液中2～3min，然后取出，以滚动的方式平贴于洁净无划痕的载物玻璃片上（切勿产生气泡），将此玻片竖立片刻，除去多余透明液后，置于恒温90～100℃的烘箱内，烘烤10～15min，取出冷却至室温，用此法透明的各蛋白区带鲜明，薄膜平整，可供直接扫描和永久保存（用氢萘或液体石蜡透明，应将漂洗过的薄膜烘干后进行透明，此法透明的薄膜不能存久，且易发生皱折）。②扫描定量：将已透明的薄膜放入全自动光密度计或其他光密度计暗箱内，进行扫描分析。
正常值
醋酸纤维薄膜电泳法：
乳糜微粒： 0g/L （0mg/dl）
极低密度脂蛋白：0.06～0.3g/L （6～30mg/dl）
低密度脂蛋白： ＜7g/L （＜700mg/dl）
高密度脂蛋白： 男：0.52±0.11g/L（43±18mg/dl）
女：0.55±0.13g/L（47±2mg/dl）
化验结果临床意义
附注
样本：可用新鲜、未冷冻的血清分离脂蛋白。血浆不适合用来做脂蛋白电泳，因为会出现一条纤维蛋白原区带。
带有清晰的分离组分的脂蛋白图形是进行准确解释的先决条件。如果能够很好地满足这些条件，在脂蛋白电泳和参考方法（超速离心法）之间就可以相当一致。各组分的精密度不同，用变异系数表示，估计一般都在5%以下。
偶尔α-脂蛋白会消失和（或）出现一条舌状的窄的α-脂蛋白区带。这是因为游离脂肪酸在。α-脂蛋白上积聚，造成了这些微粒带有电荷相等。由于α-区带密度增大，从而导致结果偏高。和沉淀技术相比，定量脂蛋白电泳的耗资较高。
相关疾病
高脂蛋白血症、高脂血症
