麝香草酚浊度试验
概述
测定血浆蛋白的水平和分析其成分是肝脏疾病重要试验之一。有关这方面的测定在别外章节中已有详尽讨论，本节中主要叙述一些和蛋白质代谢有关的简单血清胶体稳定试验。
各种血清胶体稳定性试验的原理基本相同，但所用的试剂不同，促进和抑制絮浊的作用有差异，目前临床常用的有TTT试验。
检查名称
麝香草酚浊度试验
分类
取材
血液
麝香草酚浊度试验的原理
肝脏疾病时，血清蛋白的质与量有所改变，当血清和麝香草酚巴比巴比妥液试剂作用时，麝香草酚可减低血清内脂类物质的分散力，而血清经低离子强度的巴比妥缓冲液稀释后，球蛋白的部分溶解度降低而产生沉淀，这种沉淀是球蛋白、脂类和麝香草酚复合体，使溶液变浊，其浑浊程度与沉淀的多少与肝病的严重程度有一定的关系。
试剂
麝香草酚缓冲液配制有两种常用方法：
（1）麝香草酚-巴比妥缓冲液（pH7.55±0.05）精确称取巴比妥3.09g、巴比妥钠1.69g及麝香草酚6g，倒入经煮沸除去二氧化化碳的1000ml热蒸馏水中，继续加热使溶解。室温静置过夜，若显混浊，可加麝香草酚细末少许。并激烈振荡使结晶析出，过滤后得透明溶液。此液pH7.55±0.05，装瓶内塞紧贮室温备用。若发现混浊丢弃不用。
（2）麝香草酚-Tris-HCl缓冲液的配制：
①0.5mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液（pH7.7）：称取Tris60.6g，加约800ml蒸馏水溶解，用10mol/L HCl（约加35ml）调节至pH7.7。
②100g/L麝香草酚乙醇溶液：重结晶麝香草酚10g，溶于95%乙醇中，并加乙醇至100ml。塞紧置冷处贮存。
③麝香草酚-Tris-HCl缓冲液：取蒸馏水约800ml，加热至40～50℃，加入0.5mol/L Tris-HCl缓冲液20ml，边摇边加入100g/L麝香草酚乙醇溶液10ml，最后加水至1000ml，充分混匀。室温中可至少保存3个月。
操作方法
取与标准比浊管口径相同的试管，加入新鲜血清0.05ml，再加入麝香草酚巴比巴比妥缓冲液3ml，混合，室温静置30min，再颠倒混合数次。目视比浊时，可背朝光，比浊管下衬有字白纸，辨认字迹清晰程度来判定浊度单位。与测定管浊度相同的标准比浊管的单位数，即为测定血清的单位数。如用分光光度计比浊时，以麝香草酚巴比巴比妥缓冲液校正“0”点，波长650nm，读取测定管的吸光度，查标准曲线求出浊度单位。
正常值
0～6u。
化验结果临床意义
各类血清胶体稳定性试验在不同的肝病或同一疾病的不同时期，其阳性率可有差异，各有其一定临床意义。
（1）急性肝炎的诊断：在急性肝炎和急性肝损害时，各类血清絮状、浊度试验均可出现阳性，总阳性率约80%～90%。TTT于发病一周开始升高，二周时达高峰，以后逐渐降至正常。这些改变可在黄疸前期即出现，故对急性肝炎有早期诊断意义，但不如转氨酶敏感，阳性率也比转氨酶低。出现阳性时期较转氨酶为迟，这是因为蛋白质的更新须有一定时间，如白蛋白的半寿期10～36天，因此肝脏疾病引起的蛋白质的变化常需一定时间才能表现出来。在无黄疸型肝炎病例，血清胶体稳定性试验常可作为诊断的敏感指标。如急性肝炎絮浊试验持续阳性，提示肝病有转入慢性化的趋势。
（2）肝炎与肝硬化病情的判断：在急性肝炎时，TTT的变化和血清脂质升降相平行，但随着病变的迁延化、慢性化、则与血清γ球蛋白呈正相关，故TTT持续阳性是肝病迁延化、慢性化的反映。
（3）阻塞性黄疸与肝炎的鉴别：当阻塞性黄疸患者尚无肝细胞损害时，各类血清絮浊试验多属阴性，与急性肝实质损害时不同，对于鉴别黄疸类型有一定价值。但在长期阻塞性黄疸或合并感染的病人，肝实质亦常有损害，此试验亦能呈阳性，但一般见于病程中、后期。在长期黄疸病例，如血清絮浊试验持续阴性，应考虑先天性黄疸的可能。
（4）严重妊娠恶阻与妊娠合并肝炎的鉴别：妊娠恶阻时可出现中度的高胆红素血症和转氨酶升高，但血清絮浊试验几乎全都正常；相反，妊娠合并肝炎时则在90%以上病例血清絮浊试验均呈阳性反应。
（5）脂肪肝时，TTT常升高。有人测定TTT/ZnTT比值，发现在脂肪肝时较慢性肝炎为高，认为可借此比值变化作为两者鉴别诊断的参考。在转移性肝癌时，TTT值较原发性肝癌时为低，因此对肝癌病例，此试验呈低值者宜先考虑转移性肝癌，呈高值者优先考虑原发性肝癌，但这仅有参考价值，主要还应根据临床。
（6）肝外疾病：血清胶体稳定性试验对肝病并不具有特异性，在其他可发生白蛋白减少、球蛋白（γ或β球蛋白）或类脂质增加的疾病如疟疾、结缔组织疾病、黑热病、亚急性细菌性心内膜炎、多发性骨髓瘤等疾患时，亦可呈阳性反应。
附注
TTT是一个很简单的试验，但各试验室间出入往往不小。造成此差异因素很多；首先是虽然同称为TTT试验，但各个实验室在试剂配制，标准曲线绘制或标准管配制方法上并不相同。
（1）国内所报告的TTT单位为Shank（襄克）单位。1944年Maclagen（麦克莱根）首先建立TTT试验，当时以Kingsley（金斯莱）尿蛋白比浊管表示TTT浊度单位（相当于10mg/dl尿蛋白溶液加磺柳酸所显示的浊度为一个Maclagan单位）。后来，Shank和Hoagland改用BaSO4悬液作为浊度标准，由0.0962mol/L BaCl2加H2SO4所产生的浊度相当于Maclagan所应用的Kingsley标准。但在发表文章
时，误印为0.0962N BaCl2，因此测定结果为麦氏单位的二倍（1个麦氏单位＝2个Shank单位）。
（2）血清要新鲜，应早晨空腹抽血。用分光光度计比浊法测定麝浊时，如血内脂质较多，可用生理盐水6ml代替缓冲液稀释血清，作空白管。
（3）麝香草酚-巴比妥缓冲液的pH应在7.50～7.60。pH增高，敏感度降低，可出现假阴性；pH降低，敏感度升高，可出现假阳性。
（4）为了简化手续，不少实验室用100g/L麝香草酚乙醇溶液，直接加入巴比妥缓冲液中，省去结晶和过滤步骤，但此配方较原法多含1%乙醇，试验结果表明比原配方的浊度偏离约20%，絮状试验阳性率反而降低。
（5）麝香草酚浊度试浊度试验结果随温度的改变而有所变化。一般是温度高，浊度低；温度低，浊度高。为了克服这一误差，可以从表1上将不同温度下的浊度结果换算成25℃的结果以便于比较。
使用说明：以6u一行为例，在10℃时测定的6u，实际上在25℃时为4.7u。在30℃时测定的6u，在25℃时为7.2u。余类推。
（6）配制硫酸钡标准比浊管时注意以下几点：①硫酸试剂的浓度硫酸在反应中虽然是过量的，但当浓度小于0.1mol/L，形成的硫酸钡浊度低；浓度大于0.1mol/L浊度增高。因此，硫酸试剂须严格校正至0.1mol/L。②反应温度：10℃时形成的硫酸钡颗粒细，浊度较高，结果重复性好。25℃、30℃、37℃时形成的颗粒较粗，浊度较低，重复性不易控制。③操作手法：混和方法不同，形成的硫酸钡颗粒大小不同，结果相差很大。所以，每次按规定操作可提高精密度。
（7）麝香草酚缓冲液易变质，但如保存于冰箱中，可因结晶逐渐析出而降低敏感度，故平时使用时，仍应置室温中，如显混浊，即不能用。
（8）麝香草酚应为洁白晶体，如带黄色，须重结晶处理。可按下法重结晶精制：取麝香草酚100g，溶于100ml 95%乙醇中，以吸滤漏斗过滤。滤液中加入于100ml冷蒸馏水，混匀。静置20min后吸滤，用冷蒸馏水洗结晶两次，可得到洁白的结晶，置干燥器内待完全干燥后使用。
（9）用巴比妥配制的试剂不能久置，超过2周后，TTT结果有增高趋势，一个月后明显偏高。一般认为此试剂不稳定与巴比妥有关，因为久置后，巴比妥试剂的红外线吸收曲线已有明显变化。本文所介绍麝香草酚-Tris-HCl缓冲液，具有稳定性高，所配TTT试剂放室温至少可保存3个月，且浊度结果受室温变化的影响小。
（10）光电比浊法与光电比色法有所不同，比浊法混浊液除了吸收一部分入射光以外，悬浮的颗粒还能使一部分入射光反射和折射，因此光电池所感受的光除了经过吸收以后的出射光外，还有折射的光，后者不是平行光束，混和液和光电池之间距离越大，则折射光的影响越小。所以在采用72型分光光度计比浊时，比色杯的位置应放在比色杯座的远光电池的一边，可以提高准确度。
（11）麝香草酚缓冲液中麝香草酚含量是影响结果的重要因素之一。浊度单位高低和麝香草酚含量成正比，要求使用25℃的麝香草酚饱和溶液。
缓冲液中麝香草酚含量测定法：麝香草酚标准液（1ml含0.1mg）：准确称取试剂规格麝香草酚100mg，加水溶解后加水至1L。
取待测麝香草酚缓冲液1ml，用水稀释至10ml，以后按表2进行测定。
混匀37℃水浴放置15min，750nm比色，以空白管校正吸光度至零，读取各管吸光度，按下式计算：
相关疾病
黄疸、肝硬化、脂肪肝、转移性肝癌、原发性肝癌、疟疾、多发性骨髓瘤
