血液成分制备
目录
浓缩红细胞的制备
可在全血有效保存期内的任何时间移出血浆，根据移出血浆量不同，红细胞比容可为 70％～90％，但以70％的红细胞为佳，便于输注。
制备方法
离心法
(1)用二联塑料血袋采集全血。
(2)将血袋连同转移袋一起，用塑料气包或其他方法夹持血袋，使血袋上部在离心杯中鼓起，处于直立的位置。
(3)将平衡好的成对离心杯，准确地挂在离心机转头两个对称的位置上盖好离心机内外盖，5000g离心7min，温度4℃±2℃，使红细胞快速下沉。如离心机性能有限，不可能达到以上离心力时，可根据情况，相应延长离心时间。
(4)将血袋放在血浆挤压器两夹板之间，去掉血袋与分浆管之间的堵头，让血浆流入转移袋内。
(5)热合封口，并切断连接血袋和转移袋之间的分浆管，血袋中留下部分即为浓缩红细胞。
自然沉降法
将血袋垂直吊挂于4℃±2℃冰箱内，使红细胞自然下沉1～3d，或将血袋呈70°～80°角立于冰箱，需用时，用一次性分浆器分出血浆，制得浓缩红细胞。
保存
红细胞比容不超过80％，其保存期同全血。
洗涤红细胞的制备
一般用生理盐水反复洗涤3～6次。经洗涤的红细胞，除白细胞和血小板减少外，血浆蛋白也极少，红细胞中残存的血浆蛋白含量约为原总蛋白的1％以下。
制备方法
手工洗涤法
必须在无菌室的超净台上操作。目前国家尚未生产统一的一次性洗涤器，故洗涤方法也不尽相同，在此仅介绍中国医学科学院输血研究所采用多节洗涤器 (包括1个三通接头和多个二通接头与多条塑料管连接而成)的洗涤方法。
(1)用三联塑料血袋采集全血。
(2)以1160g离心8min温度20℃。
(3)分出上层血浆至2号转移袋，将白膜层和白膜层下1.0～1.5cm厚的红细胞移至 1号转移袋，血袋中留下浓缩红细胞。
(4)将浓缩红细胞袋与多节洗涤器三通接头一端连接，1000ml或500ml袋，或 500ml瓶生理盐水和1000ml空塑料袋分别与三通接头两端连接。
(5)松开盐水袋塑料管上的止血钳，向血袋内灌入生理盐水250-300ml。
(6)取下血袋，热合封闭管口，充分混匀后再以5000g离心6min，温度4℃±2℃。
(7)将血袋再次连接到多节洗涤器第2个二通接头一端，松开空袋塑料管上的止血钳，将洗涤液及剩余的白膜层尽量挤入塑料袋内。
(8)重复步骤(5)-(7)，反复洗涤红细胞 3～6次，至最后1次挤出洗涤液及剩余白膜后，再注入约等于红细胞1/2的生理盐水，配制约为70％比容的红细胞悬液。
机器洗涤法
保存
红细胞洗涤后，可暂放在4℃±2℃冰箱保存，最好在6h内输用，保存不得超过24h。
代浆红细胞的制备
将全血离心并移除绝大部分(90％以上)血浆后，将代血浆(大多含羟乙基淀粉和葡萄糖)或晶体盐保存液加入红细胞内，代替移出的血浆，制成代浆红细胞或晶体盐红细胞悬液。
制备方法
1．用带有代血浆保存液的三联塑料袋采集全血。
2．4℃±2℃条件下，以5000g离心 7min。
3．分出上层血浆移至空转移袋。
4．再将另一转移袋内代血浆保存液加入红细胞内，其用量约等于原血浆。
5．将红细胞与代血浆保存液充分混匀。
6．热合封口并切断分浆管，制成代浆红细胞。
附
如用单袋采血，离心分出卜层血浆后，可通过连接管灌入代血浆保存液。制备的代浆红细胞在 24h内输注。
保存
保存期因代血浆保存液的种类而定，如代血浆大多数含有羟乙基淀粉和葡萄糖等，于4℃±2℃保存期为14-21d。SAG(氯化钠、腺嘌呤和葡萄糖)保存液和SAGS保存液(氯化钠、腺嘌呤、葡萄糖和蔗糖)，添加到浓缩红细胞中，其有效保存期分别为35d和 42～49d。
去白细胞的红细胞制备
制备方法
从全血或压积红细胞内去除白细胞的方法较多，其去除效果各不相同，但任何一种方法都不可能把白细胞全部除去。一般认为去除70％以上即可避免因白细胞凝集所致的发热反应。
离心法
是一种简单而较为有效的制备方法。
(1) 正位离心法：①用三联塑料袋采集全血。②以1160g离心8min，温度控制在20℃。③分出上层血浆至2号转移袋内。④挤出白膜层及靠近白膜层1.0-1.5cm厚的红细胞至1号转移袋内。⑤为提高白细胞除去率，可再将2号转移袋内的血浆返回血袋。⑥充分混匀后重复步骤②～④。⑦以原血浆配制成70％比容的去白细胞的红细胞。
(2)倒置离心法：①用特制三联塑料袋采集全血。②将血袋倒置(底部朝上)离心，离心速度、时间和温度同正位离心法。③将血袋放在倒置挤压器上，夹住2号转移袋通路，并打开1号袋通路，使血袋下部少含白细胞的红细胞流入1号转移袋，当白膜层离血袋下口约剩4cm时，适当减慢血流速度，以免形成旋涡而影响白细胞除去效果。④当白膜层离血袋下口只有2cm时，夹住通向1号转移袋通路，打开2号转移袋通路，让白膜流入2号转移袋。此时可用手指推挤白膜，尽量使更多的白膜挤入2号转移袋内，直至连接管呈现粉红色时，夹住通向2号转移袋的塑料管。⑤从挤压板上取下血袋，将去除白细胞的红细胞返回原血袋内。⑥充分混匀后重复步骤②-④，以提高白细胞去除率。⑦将血浆与红细胞一起正位离心，从血袋分出部分血浆置于红细胞袋内，配制成70％比容的去白细胞的红细胞。
过滤法
使血液通过特制过滤器，利用吸附或阻挡白细胞等原理，将白细胞除去，而制得去白细胞的红细胞。过滤法简单、方便，效果又好，它将有效地代替其他方法。
(1)尼龙纤维过滤器：根据尼龙纤维在钙离子存在下，能选择性地吸附白细胞这一特性，使血液通过尼龙纤维过滤器，将白细胞吸附，而获得去白细胞的红细胞。方法为：①用肝素抗凝采集全血1个单位，过滤前不要将此血冷却。②取出事先放入温箱加温至37℃的滤器，再用37℃盐水灌注。③将血袋和滤器连接，于1h内将血液进行过滤，即获得红细胞。
(2)棉花纤维过滤器：可用于保存期内任何抗凝血。据文献报道，接近贮存末期的血液去除白细胞的效果更好。一般过滤后的血液可除去95％以上白细胞，并保留95％以上红细胞。
(3)微聚物过滤器：全血以5000g离心 7min后，置入4℃±2℃冰箱保存，于输血前将血液通过1个孔径为20-40μm的微聚物过滤器进行过滤。
(4)用带有白细胞滤器的输血器输注浓缩红细胞。
沉降法
使用沉降剂，如大分子右旋糖酐(分子量为15万～20万)或羟乙基淀粉 (分子量为30万-40万)或羧甲基淀粉钠，促使红细胞快速下沉，而白细胞仍保留在血浆中，分出上层富含白细胞、血小板血浆，下层即为去白细胞的红细胞。所得红细胞可用生理盐水配制70％比容的红细胞悬液。本法技术简单，操作时间短，不需昂贵设备，效果好；缺点是沉降剂分子量大，抗原性强，易引起变态反应。若使用低分子或中分子右旋糖酐或羟乙基淀粉，则沉降效果差。
洗涤法
用洗涤法制备洗涤红细胞，以及解冻红细胞也属于去白细胞的红细胞。
浓缩粒(白)细胞的制备
制备方法
临床上输注白细胞主要指粒细胞，其制备方法主要利用离心、过滤、沉淀等原理。
1．血细胞分离机单采粒细胞效果较好 (制备方法见有关章节)。
2．沉降法单采粒细胞 (1)将全血采入内含大分子羟乙基淀粉及抗凝剂的二联血袋中。 (2)血袋垂直吊挂，静置15min。 (3)分出上层富含白细胞、血小板血浆至转移袋。 (4)以1220g离心5min，使白细胞下沉而血小板仍保留在上层血浆中。 (5)将上层的富血小板血浆分至红细胞袋内，回输给献血者，留下的即为浓缩粒(白)细胞。
如上反复循环4次，加工血液1600ml，同时并用皮质类固醇激素动员，可从1个献血者获得1×1010个以上的粒细胞，供患者1次输注。此法特别适用于婴儿，因只需要1袋浓缩粒细胞(400ml血液)即可提供足够的量。
3．离心挤白膜法 (1)用三联塑料血袋采集全血。 (2)以1160g离心8min，温度20℃。(3)分出上层血浆至2号转移袋，留下约 15～20ml血浆。(4)将剩余血浆连同白膜层及靠近白膜层下1.5-2.0cm厚的红细胞一起挤入1号转移袋，即为浓缩白(粒)细胞。总量为35～45ml，可获得全血中60％以上的粒(白)细胞，其总数约为1×109个。
本法的缺点是：①粒(白)细胞制得率及总数偏低。②每次输注多个献血者粒(白)细胞，易产生白细胞凝集素及HLA抗体，影响治疗效果或出现输血不良反应。③本制品含有较多的淋巴细胞，可能导致移植物抗宿主病。
保存
一般采用室温(22℃±2℃)、不摇荡的方法保存浓缩粒(白)细胞，时间不超过8h。因此，粒(白)细胞制备后应尽快输注，以免影响疗效。
富含血小板血浆的制备
血小板是3种血细胞中最小、最轻的一种，比重约为1.032。由于血小板比白细胞容易从全血中分离出来，因此血小板的输注开展较早。分离方法可以从1袋全血中提取，也可用血细胞分离机从单个献血者采集较大量的血小板，供给临床输注。
离心法：是国内目前制备富含血小板制品的主要方法。
(1)二联塑料血袋采集全血。
(2)于4～6h内使用离心(1220g 离心5min)，温度为22℃±2℃，使红细胞、白细胞基本下沉，而血小板因比重较轻，大部分仍保留在血浆中。
(3) 分出上层血浆至转移袋，此制品即为富含血小板血浆，约可获得全血中70％以上的血小板。
浓缩血小板的制备
制备方法
1．三联塑料血袋采集全血，按上述方法制备富含血小板血浆。
2．将富含血小板血浆离心(4650g离心 6min或2980g离心20min)，温度22℃±2℃，使血小板下沉。
3．分出上层少血小板血浆，留下20～30ml血浆于血小板中，即为浓缩血小板，约可获得全血中60％以上的血小板。
4．由于2次离心，制备的浓缩血小板中血小板聚集成团，必须先放在22℃±2℃环境下静置1-2h，待其自然解聚后，轻轻摇动血袋，使其成均匀混悬液后方可输注。
制备时注意点
1．采血顺利，无凝块。
2．从全血采出到制备全过程，包括离心温度，均要求在22℃+2℃环境中进行。即使不立即制备，也不要将全血放入冰箱。
3．制备时动作一定要轻，避免较强的物理刺激，而造成血小板不可逆性聚集，影响输注效果。
4．影响血小板得率的关键是第1次离心条件，包括离心速度和时间。各单位可根据所使用离心机的性能，选用最佳离心条件。
5．严格无菌操作，因在室温保存血小板，此点更为重要。
6．避免过多的白细胞、红细胞，特别是白细胞的污染，因混入大量的红、白细胞，可使血小板保存期间pH下降，更严重的是可使患者产生白细胞凝集素或HLA抗体，影响血小板治疗效果，故对血小板制品中的白细胞污染量应严加控制。
7．肉眼观察应无凝集现象。
保存
以22℃±2℃振荡保存为佳。天津医用高分子厂生产的塑料袋可保存3d，但需增加血浆量至50-70ml。一般塑料袋只能保存24h。适合血小板保存的pH为6.0～7.4。
新鲜液体血浆的制备
新鲜液体血浆含有全部凝血因子，包括第V和第Ⅷ因子，适合于没有条件冰冻保存血浆的医疗单位。
制备方法
1．用三联塑料血袋采集全血(要求采血顺利)。
2．于采血后6h内以5000g离心7min分离出上层血浆。
3．再将血浆以5000g离心5min，并分出血浆，以除去血浆中残留的细胞成分。
4．制备浓缩血小板时所获得的少血小板血浆，也同样可作为新鲜液体血浆使用。
新鲜冰冻血浆的制备
制备方法
同新鲜液体血浆含有全部凝血因子。
制备方法
1．按制备新鲜液体血浆的方法制备血浆。
2．立即将新鲜液体血浆置于-30℃以下低温冰箱或于冰乙醇浴中速冻后再转入低温冰箱贮存。操作后管理
保存
新鲜冰冻血浆在-30℃以下保存，有效期为1年。
普通液体血浆的制备
制备方法
1．全血采集后4℃±2℃冰箱保存。
2．全血在保存期间或过期5d内自然沉降或离心后分出上层血浆，即为普通液体血浆。
保存
普通液体血浆于4℃±2℃冰箱暂时保存，但必须于24h内输用。由于制备方法是非密闭性的，有可能发生细菌污染，故4℃±2℃冰箱保存，仍可能有嗜冷细菌生长。
普通冰冻血浆的制备
普通冰冻血浆含有稳定的凝血因子及白蛋白、球蛋白。
制备方法
1．按上法制备普通液体血浆。
2．立即置-30℃以下低温冰箱。
3．新鲜冰冻血浆保存期满1年后，可改为普通冰冻血浆。
4．制备冷沉淀所得的少冷沉淀血浆，也可继续置于-30℃低温冰箱保存，作为普通冰冻血浆使用。
保存
自采血日起保存期限为5年。
冷沉淀的制备
冷沉淀主要含有第Ⅷ因子、纤维蛋白原(第1因子)以及纤维结合蛋白等成分。
制备方法
1．用四联塑料血袋采集全血。
2．按制备新鲜冰冻血浆的方法制备血浆。
3．制备冷沉淀前将新鲜冰冻血浆置于 4℃±2℃冰箱(约14h)或冰水中融化。
4．待其基本融化，仍留有少量小冰块时进行离心(5000g离心10min)，温度控制在 4℃±2℃，使冷沉淀下沉。
5．尽快分出上层少冷沉淀血浆，留下约 15-25ml血浆于冷沉淀中。
6．可继续置于-30℃以下低温冰箱保存备用，或以37℃水浴中轻轻摇动融化后立即供临床输注。
7．临床输用冷沉淀前，将多袋冷沉淀融化后，揉搓袋壁，使冷沉淀分散到15～25ml血浆中；在无菌条件下，用一次性注射器把每个袋的内容物混合到一个袋中，最后用20-30ml生理盐水冲洗各袋；将此冲洗后的冷沉淀生理盐水混悬液注入到最终混合的冷沉淀袋中，热合封口，即可输注。
注意事项
第Ⅷ因子是一种很容易丧失活性的凝血因子，为了获得高活性的第Ⅷ因子，以取得最大疗效，在制备冷沉淀过程中应注意以下事项：
1．要求采血顺利，200～400ml采血时血液应在3-6min内采完，无凝块。
2．采用两次离心分离血浆，除去新鲜血浆中残留的细胞成分；因血浆冰冻时可使细胞破裂，释放凝血活性物质，影响第Ⅷ因子稳定性。
3．新鲜血浆从开始冰冻起在1h内应变成固态，温度可维持在-65℃以下，或风冷式冰箱和机械冰箱或干冰浴中(95％乙醇和碎干冰浴中，可在15min内完成冰冻)。血浆袋在浸泡液体之前应用塑料套包装好，保持其袋管干燥。
4．每400ml全血制备的冷沉淀，要求第Ⅷ因子含量在80U以上，纤维蛋白原含量在220mg以上。
保存
于-30℃以下低温冰箱保存，保存期自采血日起为1年。
