重组人干扰素α2b喷雾剂（假单胞菌）
目录
重组人干扰素α2b喷雾剂（假单胞菌）药典标准
品名
中文名
重组人干扰素α2b喷雾剂（假单胞菌）
汉语拼音
Chongzu Ren Ganraosu α2b Penwuji （Jiadanbaojun）
英文名
Recombinant Human Interferon α2b Spray （P.putida）
定义、组成及用途
本品系由高效表达人干扰素α2b基因的腐生型假单胞菌，经发酵、分离和高度纯化后获得的重组人干扰素α2b制成。含适宜稳定剂、防腐剂。
1 基本要求
生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2 制造
2.1 工程菌菌种
2.1.1 名称及来源
重组人干扰素α2b工程菌株系由带有人干扰素α2b基因的重组质粒转化的腐生型假单胞菌菌株。 2.1.2 种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。 2.1.3 菌种检定
主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。 2.1.3.1 划种LB琼脂平板
应呈典型腐生型假单胞菌集落形态，无其他杂菌生长。 2.1.3.2 染色镜检
应呈棒状，可运动，有荚膜，无芽孢。涂片染色后应呈典型的革兰氏阴性。 2.1.3.3 对抗生素的抗性
应与原始菌种相符。 2.1.3.4 电镜检查（工作种子批可免做）
应为典型腐生型假单胞菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。 2.1.3.5 生化反应
不液化明胶，不水解淀粉和聚β-羟基丁酸酯（2010年版药典三部附录XIV），不能利用反硝化作用进行厌氧呼吸，能够合成荧光色素。 2.1.3.6 干扰素表达量
在摇床中培养，应不低子原始菌种的表达量。 2.1.3.7 表达的干扰素型别
应用抗α2b型干扰素血清做中和试验，证明型别无误。 2.1.3.8 质粒检查
该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒的相符。 2.1.3.9 目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做）
2.2 原液
2.2.1 种子液制备
将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养。 2.2.2 发酵用培养基
采用适宜的不含抗生素的培养基。 2.2.3 种子液接种及发酵培养
2.2.3.2 在适宜的温度下进行发酵，应根据批准的发酵工艺进行，并确定相应的发酵条件，如温度、pH值、溶解氧、补料、发酵时间等。发酵液应定期进行质粒丢失率检查（2010年版药典三部附录Ⅸ G）。 2.2.4 发酵液处理
用高速离心法收集、处理菌体。收集到的菌体可在-20℃以下保存，保存时间应不超过1年。 2.2.5 初步纯化
采用经批准的纯化工艺进行初步纯化，使其纯度达到规定的要求。 2.2.6 高度纯化
经初步纯化后，采用经批准的纯化工艺进行高度纯化，使其达到3.1项要求，即为重组人干扰素α2b原液。除菌过滤后于适宜温度下保存，并规定其有效期。 2.2.7 原液检定
按3.1项进行。
2.3 半成品
2.3.1 配制 2.3.1.1 稀释液配制
按经批准的配方配制稀释液，按经批准的工艺进行稀释液的灭菌。冷却后应立即用于稀释。 2.3.1.2 稀释
将检定合格的含稳定剂的重组人干扰素α2b原液用2.3.1.1项稀释液稀释至所需浓度，即为半成品，于2～10℃保存。 2.3.2 半成品检定
按3.2项进行。
2.4 成品
2.4.1 分批
应符合“生物制品分批规程”规定。 2.4.2 分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”及2010年版药典三部附录Ⅰ H有关规定。 2.4.3 规格
应为经批准的规格。 2.4.4 包装
应符合．“生物制品包装规程”及2010年版药典三部附录Ⅰ H有关规定。
3 检定
3.1 原液检定
3.1.1 生物学活性
依法测定（2010年版药典三部附录Ⅹ C）。 3.1.2 蛋白质含量
依法测定（2010年版药典三部附录Ⅵ B第二法）。 3.1.3 比活性
为生物学活性与蛋白质含量之比，每1mg蛋白质应不低于1.0×108IU。 3.1.4 纯度 3.1.4.1 电泳法
依法测定（2010年版药典三部附录Ⅳ C）。用非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于10μg（考马斯亮蓝R250染色法），或5μg（银染法）。经扫描仪扫描，纯度应不低于95.0%。 3.1.4.2 高效液相色谱法
依法测定（2010年版药典三部附录Ⅲ B）。色谱柱以适合分离分子质量为5～60kD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂；流动相为0.1mol/L磷酸盐－0.1mol/L氯化钠缓冲液，pH7.0；上样量应不低于20μg，在波长280nm处检测，以干扰素色谱峰计算的理论板数应不低于1000。按面积归一化法计算，干扰素主峰面积应不低于总面积的95.0%。 3.1.5 分子量
依法测定（2010年版药典三部附录Ⅳ C）。用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于1.0μg，制品的分子质量应为19.2kD±1.9kD。 3.1.6 外源性DNA残留量
每1次人用剂量应不高于10ng（2010年版药典三部附录Ⅸ B）。 3.1.7 宿主菌蛋白质残留量
应不高于蛋白质总量的0.10%（2010年版药典三部附录Ⅸ D）。 3.1.8 残余抗生素活性
依法测定（2010年版药典三部附录Ⅸ A），不应有残余氨苄西林或其他抗生素活性。 3.1.9 等电点
主区带应为5.7～6.7，且供试品的等电点图谱应与对照品的一致（2010年版药典三部附录Ⅳ D）。 3.1.10 紫外光谱
用水或生理氯化钠溶液将供试品稀释至约100～500μg/ml，在光路1cm、波长230～360nm下进行扫描，最大吸收峰波长应为278nm±3nm（2010年版药典三部附录Ⅱ A）。 3.1.11 肽图
依法测定（2010年版药典三部附录Ⅷ E），应与对照品图形一致。 3.1.12 N端氨基酸序列（至少每年测定1次）
Cys-Asp-Leu-Pro-Gln-Thr-His-Ser-Leu-Gly-Ser-Arg-Arg-Thr-Leu。
3.2 半成品检定无菌检查
依法检查（2010年版药典三部附录Ⅻ A），应符合规定。
3.3 成品检定
3.3.1 鉴别试验
按免疫印迹法（2010年版药典三部附录Ⅷ A）或免疫斑点法（2010年版药典三部附录Ⅷ B）测定，应为阳性。 3.3.2 物理检查 3.3.2.1 外观
应为无色或微黄色、略带黏稠的液体。 3.3.2.2 装量
依法检查（2010年版药典三部附录Ⅰ H），应符合规定。 3.3.3 化学检定 pH值
应为5.0～7.5（2010年版药典三部附录Ⅴ A）。 3.3.4 生物学活性
应为标示量的80%～150%（2010年版药典三部附录Ⅹ C）。 3.3.5 无菌检查
依法检查（2010年版药典三部附录Ⅻ A），应符合规定。 3.3.6 每瓶总喷次
依法测定（2010年版药典三部附录Ⅰ H），应符合规定。 3.3.7 每喷喷量
依法测定（2010年版药典三部附录Ⅰ H），应符合规定。
4 保存、运输及有效期
于2～10℃避光保存和运输。自生产之日起，按批准的有效期执行。
5 使用说明
应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。
版本
《中华人民共和国药典》2010年版
