血清免疫球蛋白A
目录
概述
IgA占血清免疫球蛋白总量10%～20%，可分为血清型和分泌型。分泌型IgA是外分泌液（如初乳、唾液、眼泪、肠道分泌液和支气管分泌液）中的主要免疫球蛋白。因此，其在抗感染防御第一线中起重要作用，尤其在呼吸道和肠道，可称为“局部免疫”。
血清免疫球蛋白A的医学检查
检查名称
血清免疫球蛋白A
分类
取材
血清免疫球蛋白A的测定原理
（1）单向免疫扩散法：将被检血清做一定倍数的稀释，加入抗体琼脂板的孔内，让其自由扩散，当抗原抗体比例适当，出现白色沉淀环。其直径与抗原（IgG、IgA、IgM）浓度的对数成直线关系。查标准曲线，乘以稀释倍数即得免疫球蛋白的含量。
（2）免疫比浊法：
①透射比浊法：抗原与抗体在比例合适（抗体必须过量）时，形成免疫复合物（IC），后者在PEG等作用下，在液相中形成微粒。当抗体浓度固定时，IC的量与检样中抗原的量成正比，测其吸光度可间接反映抗原的含量。
②终点散射比浊法：抗原和相应抗体结合后，经一定时间形成复合物，用散射比浊仪，测定复合物散射光强度，间接反映抗原含量。
试剂
（1）单向免疫扩散法：
②10g/L 0.12mol/L pH 8.6巴比妥琼脂。
③抗人IgG、IgA、IgM血清和参考标准血清，生物制品所供应。
④5ml/L过氧乙乙乙酸。
⑤8cm×14.5cm，厚3mm的玻璃板或按本单位检验数量设计数块，洗净后干燥备用。
⑥“凹”型模板：自制用厚5mm、长14.5cm，宽8cm的玻璃丝层压板或电木制成，呈“凹”型，边宽1cm，中间部分去掉即成。也可用生物制品所出售的成品塑料模板。
⑦打孔器：为金属圆筒，内径3mm。
⑧铁夹子或文具夹1套3只。
（2）免疫比浊法：
①透射比浊法：包括：抗血清（要求高效价、高纯度、高亲和力，且不含任何干扰粒子）；参考品（采用国际参考品或经其标化的参考品）；缓冲液（各仪器常有指定缓冲液）。
②终点散射比浊法：免疫比浊仪配有IgG、IgA、IgM、C3、C4试剂盒，内含稀释液、缓冲液、抗血清等，按说明书配制。
操作方法
（1）单向免疫扩散法：
①抗体琼脂板的制备：将“凹”型模板夹于两块玻璃板之间，在玻璃板左、右、下各用铁夹1只夹紧。将上述加热融化的10g/L琼脂分装3支试管，每管14.7ml，然后移入56℃水浴中，待试管内温度降至56℃后，分别加入上述抗人IgG、IgA、IgM血清（例如其抗血清效价为1∶50，即各管分别加入0.3ml抗人IgG、IgA、IgM血清），使其最终稀释倍数符合瓶签所标单扩散效价，混匀后，分别倒入模板内（要迅速，防止琼脂凝固）。冷却后，取去上层玻璃及模板，即得平整均匀的抗体琼脂板。
②打孔：取打孔器在抗体琼脂板上相距15mm（孔中心至孔中心）打孔，用针头挑去孔内的琼脂，孔边要求圆而规整，无缺损，无毛刺。有现货供应，可供选用。
③参考血清的稀释。
A.取14支试管并编号2-15。
B.第2管加入生理盐水0.1ml，从第3管起至第15管中加生理盐水0.2ml。
C.取冻干参考血清1支（标明0.5ml），先加蒸馏水0.5ml溶解后再加生理盐水0.25ml，混匀后1∶1.5倍稀释基础液作第1管。
D.从第1管中先取0.3ml加入第2管，再取0.2ml加入第3管。
E.用0.2ml吸管从第2管内吸出0.2ml加入第4管，混匀后再吸出0.2ml加入第6管……，以此类推跳管稀释至14管。另用0.2ml吸管从第3管内吸出0.2ml加入第5管，混匀后再吸0.2ml加入第7管……，以此类推跳管稀释至15管。如此稀释后各管中参考血清稀释倍数分别为1.5、2、3、4、6、8、12、16、24、32、48、64、96、128、192。
从第1、3、5、7、9管取样作IgM标准曲线。从第4、6、8、10、12管取样作IgA标准曲线。从第7、9、11、13、15管取样作IgG标准曲线。
F.以8310参考血清为例，经如上稀释3种Ig各5管的含量与被检标本的稀释倍数见表1。
有的参考血清是以U/ml（即国际单位/ml）来表示，它与g/L的换算关系如下：
IgG：1U/ml＝0.0804g/L；IgA：1U/ml＝0.0142g/L；IgM：1U/ml＝0.00847g/L；IgD：1U/ml＝1.41mg/L。
④待检血清的稀释：取3支试管，分别标明IgG、IgA、IgM，然后依次加入生理盐水0.49ml、0.45ml、0.4ml。用微量注射器取待检血清10μl加于IgG试管中，取50μl加于IgA试管内，取100μl加于IgM试管内，混匀。待检IgG、IgA、IgM的稀释度则分别为1∶50、1∶10、1∶5。
⑤加样：取IgG、IgA、IgM不同浓度的参考血清分别在IgG、IgA、IgM抗体琼脂板上各加3孔，每孔10μl。稀释的待检血清在三块抗体琼脂板上每个标本各加2孔，每孔10μl。
⑥将加好样的抗体琼脂板先放在水平的桌面上30min左右，再移至有盖湿盒内，置37℃水箱内，IgG、IgA孵育24h，IgM孵育48h，观察结果。如沉淀环不明显，可用生理盐水浸泡1h，中间换2次生理盐水，再用5ml/L过氧乙乙乙酸浸泡10min。
⑦读取结果：可用放大器，菌落计数器或用精度0.1mm游标卡尺，准确地测量沉淀环直径，分别量出参考血清各浓度和被检血清之平均直径。
⑧绘制标准曲线：在半对数纸上以参考血清含量为横坐标，各浓度平均沉淀环（直径一孔径）2为纵坐标绘制曲线。若几个点不在一条直线上，相差较大，应查找原因后重新测定。若几个点基本在一条线上，可经统计回归方程计算后画成一条标准曲线。
⑨以待检血清的沉淀平均直径（直径-孔径）2在标准曲线中查出其浓度，再乘以稀释倍数，即为IgM、IgA、IgG结果，以g/L报告之。
（2）免疫比浊法：
①透射比浊法：
A.抗血清浓度选择：与参考品进行方阵滴定，最适稀释度的原则为：保持抗体过量，线性范围较宽，与相应Ig反应后产生浊度较高。
B.标准曲线：将Ig参考品用稀释液稀释成不同浓度：IgG 5.0、9.0、13.0、17.0、21.0g/L；IgA 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0g/L；IgM 0.5、1.2、1.9、2.6、3.3g/L。每个稀释度设3支复管，每管25μl。加入最适稀释度抗血清，每管2.5ml。37℃水浴1h（IgG）或2h（IgA、IgM）后，用浊度计或比色计在495nm测吸光度。以Ig浓度为横坐标，其吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
C.标本检测：检测步骤与制备标准曲线相同。测IgG时，待检血清1∶40稀释；测IgA、IgM时1∶5稀释。每批试验同时制标准曲线，并设标本对照（标本加稀释液）和抗血清对照。
②终点散射比浊法：用专用比浊管加入缓冲液0.6ml、1∶36（测IgG、IgA、IgM、C3、C4等）或1∶216（测IgG）稀释样品50μl，再加入抗血清50μl，混匀后37℃水浴30min。用激光免疫比浊仪，按预测项目（如IgG或IgA）键，以空白管（不加抗血清）调零，按测定键，测定各管，即显示所测项目含量。
正常值
免疫比浊法、放射免疫扩散法（RID法）：
脐带： 0～50 mg/L （0～5mg/dl）
新生儿： 0～22 mg/L （0～2.2mg/dl）
0.5～6个月：30～820 mg/L （3～82mg/dl）
6个月～2岁：140～1080mg/L （14～108mg/dl）
2～6岁： 230～1900mg/L （23～190mg/dl）
6～12岁： 290～2700mg/L （29～270mg/dl）
12～16岁： 810～2320mg/L （81～232mg/dl）
成人： 760～3900mg/L （76～390mg/dl）
化验结果临床意义
（1）升高：IgA型多发性骨髓瘤、系统性红斑狼疮（SLE）、结节病、类风湿性关节炎、白塞氏（Behcet）综合征、门静脉性肝硬化、某些感染性疾病、湿疹、血小板减少症、Wiskott-Aldrich综合征（湿疹血小板减少多次感染）、慢支缓解期等。分泌型IgA介于500～2500mg/L则病情重，病程长者＜500mg/L。脐带血IgA升高：风疹、单纯疱疹、弓形体病、巨细胞病毒、柯萨奇病毒、革兰氏阴性杆菌宫内感染等。
（2）降低：遗传性毛细血管扩张症（80%）、非IgA型多发性骨髓瘤、重链病、轻链病、吸收不良综合征、原发性无丙种球蛋白血症、继发性蛋白血症、继发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷病（放射线照射、使用免疫抑制剂）、反复呼吸道感染、输血反应、自身免疫性疾病、肾病综合征、慢性淋巴细胞白血病、霍奇金病、遗传性胸腺发育不全、丙种球蛋白异常血异常血症Ⅲ型、丙种球蛋白异常血异常血症Ⅰ型（IgG、IgA减低、IgM增加）、丙种球蛋白异常血异常血症Ⅱ型（无IgA、IgM，IgG正常）等（表2）。
附注
IgA不能通过胎盘，故初生婴儿易患呼吸道和肠道感染。出血后4～6个月，才开始合成IgA，以后逐渐升高，青少年时达成人水平。
相关疾病
多发性骨髓瘤、系统性红斑狼疮、红斑狼疮、结节病、类风湿性关节炎、肝硬化、湿疹、风疹、单纯疱疹、弓形体病、重链病、肾病综合征、慢性淋巴细胞白血病、霍奇金病
